Titolo. Sommario Massa 1 Massa 2 Stato dellarte.

Presentazione sul tema: "Titolo. Sommario Massa 1 Massa 2 Stato dellarte."— Transcript della presentazione:

1 Titolo

2 Sommario

3 Massa 1

4 Massa 2

5 Stato dellarte

6 The Field-Flow Fractionation principle Thickness Externalfield Sample introduction Flow Detector Length Breadth Parabolic flow Thickness Sample

7 HF FlFFF / perché? A B C D

8 The HF FlFFF channel Flow Field Flow 1/8 PEEK ferrule 1/8 1/8 Teflon tube cPVC / PSf HF membrane 24x0.08 ID cm 1/8 PE fitting 1/8 PE Tee

9 Modo normale in HF FlFFF Meccanismo di ritenzione Browniano Modo normale in HF FlFFF Meccanismo di ritenzione Browniano v l Flusso z Campo L U x rfrfrfrf

10 Fase mobile: Ammonio acetato 50 mM ;pH7 V in =0.70 ml/min ;V rad =0.38 ml/min BSA 2% in FM ;mw 66 kDa Hrp 1% in FM ; mw40 kDa AP 1% in FM ; mw 160 kDa Fer 1% in FM ; mw 449 kDa Frazionamento di proteine in HF FlFFF

11 Y = A + B * X ParameterValueError A-5.929670.30651 b-0.375130.02702 Costruzione della retta di taratura lnD vs lnM t R = 8D ln V out V in D= kT 3 d rf2rf2 D=A M -b

12 NUOVO ASSETTO STRUMENTALE PER ACCOPPIAMENTO HF FFF ES/TOF/MS mobile Fase He W W o oo o oo ES/TOF/MS Rivelatore UV-VIS (DAD) POMPA II Acquisizione ed elaborazione dati Acquisizione ed elaborazione dati POMPA I M1M1 M2M2 W Hollow fiber

13 +55 +50 +45 +40 +36 +60 66397.8 Peso Molecolare calcolato:66397.81±1.74 Peso Molecolare teorico: 66398.61 BSA non denaturata UV TIC

14 Spettro HF-FFF-MS della Mioglobina A9A8 A7 A6 17566.70 A:17566.69±0.58 Da Peso Molecolare Mioglobina:16951.51 Da Peso Molecolare Eme:615.35 Da

15 B11 B10 B9 B8 B7 A10 A9 A8 A7 A:17566.69±0.58 Da B:16951.48±0.27 Da HF-FFF-MS LC-MS UV

16 A9 +Na + +2Na + +3Na + +CH 3 COO - Introduzione Diretta HF-FFF Confronto spettri ES/MS del complesso Mioglobina/Eme

17 A 41521.9 B 41600.4 C 42343.1 D 42422.0 E 43165.0 F 43243.0 Spettro dellHRP TICUV

18 C 42343.1 D 42422.0 E 43165.0 F 43244.1 Glicosilazione A 41521.5 B 41600.4 2 Ca 2+

19 Conclusioni e Prospettive

20 Ringraziamenti

21 Efficiency in HF FlFFF ipolylongneq H inj HHHHH Focusing L0L0 van Bruijnsvoort, M.; Kok, W.Th; Tijssen, R. Anal Chem 2001, 73, 4736 Elution

22 +8 +9 +7 +6+10 Peso Molecolare misurato:14304.94±0.35 Da Peso Molecolare teorico: 14305.16 Da 14304.9

23 +8 +7 +9 Peso Molecolare misurato:14305.06±1.05 Da 14305.1 Spettro ES/MS del lisozima separato in FFF dalla BSA

24 Peso Molecolare misurato:66399.53±4.38 Da 66399.53 Liso+8 Liso+7 +40 +35 +30 +27 +43 Spettro ES/MS della BSA separata in FFF dal lisozima TICUV

25 The HF FlFFF instrumental scheme Waste Metering valve 4-way valve T-valve Mobile phase 0 1 2 3 Waste Injection port Metering valve Mobile phase 0.7 5 0.50 Pump 1 0.7 5 0.50 Pump 2 Hollow fiber channel Pressure gauge Pressure gauge 0 1 2 3 UV-DAD ESI/qTOF Splitting valve

26 Basic expressions in normal HF FlFFF Retention Flow Field