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ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO Esercitatori. CONDIZIONI DI UTILIZZO PER LA PCR  2° DAY Thermal Cycler 94°C 58°C 72°C 30’’ 1’ 94°C 30’’’ 72°C 5’4°C.

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1 ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO Esercitatori

2 CONDIZIONI DI UTILIZZO PER LA PCR  2° DAY Thermal Cycler 94°C 58°C 72°C 30’’ 1’ 94°C 30’’’ 72°C 5’4°C  28 Cycles (2 n -2n)x n= cycles number x= starting template DNA The integrity of PCR amplicons will be analyzed by electroforesis

3 ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO  2° DAY Permette la separazione di acidi nucleici in funzione delle loro dimensioni, della carica e della forma E’ una tecnica fondamentale per: 1_l’analisi (elettroforesi analitica); 2_la purificazione degli acidi nucleici (elettroforesi preparativa)

4  2° DAY - + RNA e DNA sono carichi negativamente catodo anodo Gli acidi nucleici sono carichi negativamente ed in un campo elettrico migrano dal polo negativo verso il polo positivo. ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO

5  2° DAY Effetto “setaccio” in un gel uniforme - + Nell’elettroforesi gli acidi nucleici vengono sottoposti ad un campo elettrico (vengono “fatti migrare” o “correre”) all’interno di una matrice (gel di agarosio o poliacrilammide). ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO

6  2° DAY L’agarosio è un polisaccaride, isolato da un’alga, costituito da residui alternati di D-galattosio e 3,6-anidro-L-galattosio. L’elettroforesi in gel di agarosio consente la separazione di molecole di grandi dimensioni ( paia basi). Concentrazione di agarosio Risoluzione 0.8% : 0.5 – 20 kb 2% : 0.1 – 3 kb 2% : 0.1 – 3 kb ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO

7 PROTOCOLLO GEL AGAROSIO  2° DAY 100V0,2A Polo + Polo - 1% agarose gel in 1X TAE electroforesis buffer Run Time: 40 min. Voltage: 80 V Samples: 1/20 final Volume (5  l) + Loading buffer

8 CORSA SU GEL AGAROSIO  2° DAY 100V0,2A Polo + Polo - ON White UV

9 CORSA SU GEL DI AGAROSIO DEI PLASMIDI  3° DAY

10 NANODROP: Dosaggio Spetrofotometrico del DNA Plasmidico  3° DAY


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