La presentazione è in caricamento. Aspetta per favore

La presentazione è in caricamento. Aspetta per favore

TIPIZZAZIONE MOLECOLARE DI CLOSTRIDIUM DIFFICILE Vincenza Romano, PhD

Presentazioni simili


Presentazione sul tema: "TIPIZZAZIONE MOLECOLARE DI CLOSTRIDIUM DIFFICILE Vincenza Romano, PhD"— Transcript della presentazione:

1 TIPIZZAZIONE MOLECOLARE DI CLOSTRIDIUM DIFFICILE Vincenza Romano, PhD

2 Denève et al., 2009

3 Tossine A e B Rispettivamente citotossina ed enterotossina. Codificate a livello di uno stesso Locus genico: PaLoc Mutazioni nei geni per le tossine danno origine ai diversi tossinotipi. Mappa parziale del locus di patogenicità Rupnik et. al TcdA e TcdB

4 4 Large Clostridial toxins Major virulence factors Intracellular Glucosyltransferases Glucosylati ng enzymatic domain Autocatality c Processing domain Translocati ng domain Binding domain TcdA e TcdB

5 cdtA componente catalitica e cdtB componente di legame. E stato dimostrato che questa tossina è presente solo nei campioni con modificazioni nei geni per le tossine A e B, fatta eccezione per il tossinotipo VIII. (Stubbs et al. 2000). Tossina Binaria CDT

6 6 Introduction

7 Tecniche molecolari Identificazione e profilo tossigenico Toxinotyping Ribotyping

8 MD PhD E. J. Kuijper Lieden University Medical Center, Olanda PCR per GluD e tossina B PCR per tossina A (con e senza delezione) MD PhD Maja Rupnik University of Maribor, Slovenia Toxinotyping

9 Duplex PCR gene tossina A (con e senza delezione). tcdA tcdB and gluD Deletion tcdA (314 bp) tcdA (369 bp) tcdB (200 bp) gluD (158 bp) Duplex PCR per gene GluD e gene tossina B Identificazione e profilo tossigenico

10 PCR separate: PCR per la Tossina binaria (Stubbs et al) cdtA cdtB Binary toxin genes 327 bp 451 bp

11 This technique allows to the identification of 32 toxinotypes designated with 0 (if identical to the reference strain VPI 10463), and with I to XXXI if presenting variations in the toxin genes. TOXINOTYPING

12 16s 23s ITS RIBOTYPING Analisi dei profili mediante Gel Compare (Bionumerics)

13 Correlazione tra profilo tossigenico e suddivisione ottenuta tramite PCR ribotipo

14 METODI Più di 220 ribotipi

15 001A+B+CDT-0 002A+B+CDT-0 003A+B+CDT-I 012A+B+CDT-0 014/020A+B+CDT-0 015A+B+CDT-0 017A-B+CDT-VIII 018A+B+CDT-0 023A+B+CDT+IV 027 A+B+CDT+III 029A+B+CDT-0 046A+B+CDT-0 053A+B+CDT-0 056A+B+CDT-XII 070A+B+CDT-XIII 075A+B+CDT+III 078A+B+CDT+V 081A+B+CDT-0 087A+B+CDT A+B+CDT A+B+CDT+V 050 A+B+CDT A+B+CDT A+B+CDT A+B+CDT+V 010 Non tossigenicoNT 013 A+B+CDT-0 Ribotipi più comuni

16 16 Geographical distribution of C. difficile PCR ribotypes in European countries in November 2008 (From Bauer et al., 2011) Most isolated ribotypes in CDI-cases

17 Grazie per lattenzione


Scaricare ppt "TIPIZZAZIONE MOLECOLARE DI CLOSTRIDIUM DIFFICILE Vincenza Romano, PhD"

Presentazioni simili


Annunci Google