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Elettroforesi su gel dagarosio Istituto M. Montessori A.S. 2010/2011 Esperimento effettuato il 3/2/2011 dalla classe 4°As con la Prof.ssa Lucia Capasso.

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1 Elettroforesi su gel dagarosio Istituto M. Montessori A.S. 2010/2011 Esperimento effettuato il 3/2/2011 dalla classe 4°As con la Prof.ssa Lucia Capasso Realizzazione grafica di Andrea DEusebi

2 ELETTROFORESI SU GEL Permette la separazione di frammenti di DNA/RNA da una miscela complessa E una tecnica fondamentale per: lanalisi (elettroforesi analitica ) lanalisi (elettroforesi analitica ) la purificazione degli acidi nucleici (elettroforesi preparativa ) la purificazione degli acidi nucleici (elettroforesi preparativa )

3 - + RNA e DNA sono carichi negativamente catodo anodo

4 Effetto setaccio in un gel uniforme - +

5 ELETTROFORESI IN GEL DI AGAROSIO Lagarosio è un polisaccaride costituito da residui alternati di D- galattosio e 3,6-anidro-L-galattosio.

6 Celle elettroforetiche Coloranti Etidio bromuro Siringhe da 1 ml Generatori di corrente- pile alcaline 9v MATERIALI

7 PREPARAZIONE GEL DAGAROSIO Alla soluzione dagarosio si aggiunge si aggiunge Etidio Bromuro Si scioglie lagarosio in polvere in una soluzione tampone a 100°C Dopo la solidificazione del gel si può rimuovere il Pettine.

8 45V0,2A tampone elettroforetico generatore di corrente Polo + Polo - gel di agarosio 1.2% scatola elettroforetica ELETTROFORESI IN GEL DI AGAROSIO

9 45V0,2A Polo + Polo - ELETTROFORESI IN GEL DI AGAROSIO

10 45V0,2A Polo + Polo - ON ELETTROFORESI IN GEL DI AGAROSIO

11 45V0,2A Polo + Polo - ON ELETTROFORESI IN GEL DI AGAROSIO

12 1. Prelevare il colorante con la pipetta 2. Inserire il colorante in uno dei pozzetti 3. Colorazione dei pozzetti 4. Cella pronta per elettroforesi

13 5. Prendere delle lamine di carbonio 6. Inserire le lamine di carbonio nella fessura 7. Attaccare i coccodrilli degli elettrodi sulle lamine di carbonio 8. Verificare dopo pochi secondi la presenza delle bollicine vicino lanodo

14 Elettroforesi in corso, i colori migrano verso il polo positivo

15 Gli acidi nucleici a singolo filamento (come lRNA) tendono a formare complesse strutture secondarie, pertanto la loro corsa elettroforetica è fortemente influenzata dal modo in cui si ripiegano. NB LRNA prima di essere separato per elettroforesi deve essere prima denaturato, al fine di mantenere le molecole in forma lineare NB ELETTROFORESI IN CONDIZIONI DENATURANTI Agenti denaturanti comunemente usati: calore, formaldeide, formammide, urea

16 TUTTI AL LAVORO!

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