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By NA Citogenetica II La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso lanalisi citologica dei cromosomi al microscopio. Ferguson-Smith.

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1 By NA Citogenetica II La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso lanalisi citologica dei cromosomi al microscopio. Ferguson-Smith

2 By NA La CML è stata la prima malattia neoplastica dell uomo in cui una specifica anomalia del cariotipo, il cromosoma Philadelphia (Ph), sia stata associata alla insorgenza della leucemia. CML, Leucemia Mieloide Cronica

3 By NA cromosoma non normale chr Philadelphia (1961) Nel 95% dei casi di CML Indagini FISH E MOLECOLARI SI FORMANO DUE GENI DI FUSIONE: - ABL-BCR su DER9 (nessuna proteina prodotta) - BCR-ABL su Ph (proteina di fusione coinvolta nella proliferazone cellulare) ABL BCR ABL/BCR BCR/ABL CML, Leucemia Mieloide Cronica Traslocazione reciproca braccio lungo chr.9 e il braccio lungo chr.22: t(9;22)(q34;q11).

4 By NA (Ph) FISH nella CML 3 spot

5 By NA (Ph) FISH nella CML colocalizzazione

6 By NA FISH nella CML 4 spot e colocalizzazione

7 By NA CML esempi

8 By NA CML esempi

9 By NA INVERSIONE inv(16)(p13;q22) (CBFB-MYH11) AML, Leucemia Mieloide Acuta

10 By NA AML, Leucemia Mieloide Acuta

11 By NA Esempio delluso di librerie totali per evidenziare riarrangiamenti Traslocazioni complesse in AML t(8;13;14)

12 By NA La traslocazione t(15;17)(q22;q21) è associata clinicamente alla leucemia acuta promielocitica (APL) Leucemia Acuta Promielocitica (APL) geni coinvolti PML-RAR ) In verde chr17 In rosso chr15 15 der15 der17 17

13 By NA t(15;17)(q22;q21) La FISH permette di trovare traslocazioni criptiche (quelle che non si vedono dallanalisi del cariotipo) Leucemia Acuta Promielocitica (APL) 15 der15 der17 17

14 By NA t(8;14) Linfomi Non Hodgkin by GP&NA

15 By NA TRASLOCAZIONE t(14;18)(q32;q21) Linfomi Non Hodgkin catene pesanti immunoglobuline oncogene BCL2

16 By NA Caso I * Paziente 38enne allinizio della gravidanza decide di ricorrere alla diagnosi prenatale sotto indicazione del consulente genetico che lha informata dellaumentato rischio di aneuploidie cromosomiche fetali nelle madri con età avanzata. * Due precedenti gravidanze dalle quali ha avuto due figli fenotipicamente normali. * Assenza di aborti spontanei. traslocazione reciproca t (13;19) nel feto traslocazione reciproca t (13;19) nel padre

17 By NA Procedura diagnostica ANALISI CITOGENETICA: * campione di liquido amniotico aspirato con lamniocentesi; * allestimento del preparato citogenetico e analisi del cariotipo; traslocazione reciproca t (13;19) nel feto

18 By NA * campione di sangue periferico di entrambi i genitori ; * allestimento del preparato citogenetico e analisi del cariotipo ; Procedura diagnostica traslocazione reciproca t(13;19) nel padre

19 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH I der(19) der(13)

20 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH II

21 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH III Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19 presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH. tre segnali individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in questo caso dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma normale e un segnale su ciascun derivativo. per abbreviare i tempi si puo eseguire una coibridazione marcando contemporaneamente due o tre sonde di DNA con diversi fluorocromi. Cy3 Fluor-X Cy5

22 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH IV

23 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH V RP11-84C17 RP11-298C17 RP11-19I2 chr19:7,777, ,8013 chr19:9,998,865-10,195,739 chr19:11,643,368-11,816,255

24 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH VI Il breakpoint sul cromosoma 19 è situato tra la sonda prossimale RP11-52O9 e la sonda distale RP11-717H11. der(13) chr 19 der(19) chr 19 chr19:6,726,912-6,917,544 chr19:7,163,629-7,377,296

25 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH VII RP-1152O9 RP11-717H RP-1152O9 der(13)der(19)

26 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH VIII

27 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH IX

28 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH X La sonda RP11-976L2 emette fluorescenza sul cromosoma 13 e sul der(13) (freccia rossa). La sonda RP C18 emette invece tre segnali : sul cromosoma 13, sul der(19) (freccia verde) e sul der(13) (freccia verde). IL BREAKPOINT SUL CROMOSOMA 13 CADE ALLINTERNO DEL BAC 1140C18

29 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH XI RP C18 RP11-976L2

30 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19 presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH. tre segnali individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in questo caso dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma normale e un segnale su ciascun derivativo. per abbreviare i tempi si puo eseguire una coibridazione marcando contemporaneamente due o tre sonde di DNA con diversi fluorocromi. Cy3 Fluor-X Cy5

31 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19 presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH. tre segnali individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in questo caso dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma normale e un segnale su ciascun derivativo. per abbreviare i tempi si puo eseguire una coibridazione marcando contemporaneamente due o tre sonde di DNA con diversi fluorocromi. Cy3 Fluor-X Cy5


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