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By NA Citogenetica II La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso lanalisi citologica dei cromosomi al microscopio. Ferguson-Smith.

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1 By NA Citogenetica II La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso lanalisi citologica dei cromosomi al microscopio. Ferguson-Smith

2 By NA La CML è stata la prima malattia neoplastica dell uomo in cui una specifica anomalia del cariotipo, il cromosoma Philadelphia (Ph), sia stata associata alla insorgenza della leucemia. CML, Leucemia Mieloide Cronica

3 By NA cromosoma non normale chr Philadelphia (1961) Nel 95% dei casi di CML Indagini FISH E MOLECOLARI SI FORMANO DUE GENI DI FUSIONE: - ABL-BCR su DER9 (nessuna proteina prodotta) - BCR-ABL su Ph (proteina di fusione coinvolta nella proliferazone cellulare) ABL BCR ABL/BCR BCR/ABL CML, Leucemia Mieloide Cronica Traslocazione reciproca braccio lungo chr.9 e il braccio lungo chr.22: t(9;22)(q34;q11).

4 By NA (Ph) FISH nella CML 3 spot

5 By NA (Ph) FISH nella CML colocalizzazione

6 By NA FISH nella CML 4 spot e colocalizzazione

7 By NA CML esempi

8 By NA CML esempi

9 By NA INVERSIONE inv(16)(p13;q22) (CBFB-MYH11) AML, Leucemia Mieloide Acuta

10 By NA AML, Leucemia Mieloide Acuta

11 By NA Esempio delluso di librerie totali per evidenziare riarrangiamenti Traslocazioni complesse in AML t(8;13;14)

12 By NA La traslocazione t(15;17)(q22;q21) è associata clinicamente alla leucemia acuta promielocitica (APL) Leucemia Acuta Promielocitica (APL) geni coinvolti PML-RAR ) In verde chr17 In rosso chr15 15 der15 der17 17

13 By NA t(15;17)(q22;q21) La FISH permette di trovare traslocazioni criptiche (quelle che non si vedono dallanalisi del cariotipo) Leucemia Acuta Promielocitica (APL) 15 der15 der17 17

14 By NA t(8;14) Linfomi Non Hodgkin by GP&NA

15 By NA TRASLOCAZIONE t(14;18)(q32;q21) Linfomi Non Hodgkin catene pesanti immunoglobuline oncogene BCL2

16 By NA Caso I * Paziente 38enne allinizio della gravidanza decide di ricorrere alla diagnosi prenatale sotto indicazione del consulente genetico che lha informata dellaumentato rischio di aneuploidie cromosomiche fetali nelle madri con età avanzata. * Due precedenti gravidanze dalle quali ha avuto due figli fenotipicamente normali. * Assenza di aborti spontanei. traslocazione reciproca t (13;19) nel feto traslocazione reciproca t (13;19) nel padre

17 By NA Procedura diagnostica ANALISI CITOGENETICA: * campione di liquido amniotico aspirato con lamniocentesi; * allestimento del preparato citogenetico e analisi del cariotipo; traslocazione reciproca t (13;19) nel feto

18 By NA * campione di sangue periferico di entrambi i genitori ; * allestimento del preparato citogenetico e analisi del cariotipo ; Procedura diagnostica traslocazione reciproca t(13;19) nel padre

19 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH I 13.3 13.2 13.1 12 13.1 13.2 13.3 13.4 13 der(19) 19 13 12 11.2 12 13 14 21 22 31 32 33 34 13.3 13.2 13.1 12 13.1 13.2 13.3 13.4 19 14 21 22 31 32 33 34 13 12 11.2 12 13 14 13.3 der(13)

20 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH II

21 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH III Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19 presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH. tre segnali individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in questo caso dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma normale e un segnale su ciascun derivativo. per abbreviare i tempi si puo eseguire una coibridazione marcando contemporaneamente due o tre sonde di DNA con diversi fluorocromi. Cy3 Fluor-X Cy5

22 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH IV

23 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH V RP11-84C17 RP11-298C17 RP11-19I2 chr19:7,777,647-777,8013 chr19:9,998,865-10,195,739 chr19:11,643,368-11,816,255

24 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH VI Il breakpoint sul cromosoma 19 è situato tra la sonda prossimale RP11-52O9 e la sonda distale RP11-717H11. der(13) chr 19 der(19) chr 19 chr19:6,726,912-6,917,544 chr19:7,163,629-7,377,296

25 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH VII 13.3 13.2 13.1 12 13.1 13.2 13.3 13.4 RP-1152O9 RP11-717H11 13 12 11.2 12 13 14 13.3 RP-1152O9 der(13)der(19) 19 13.3 13.2 13.1 12 13.1 13.2 13.3 13.4 19 14 21 22 31 32 33 34

26 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH VIII

27 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH IX

28 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH X La sonda RP11-976L2 emette fluorescenza sul cromosoma 13 e sul der(13) (freccia rossa). La sonda RP11-1140C18 emette invece tre segnali : sul cromosoma 13, sul der(19) (freccia verde) e sul der(13) (freccia verde). IL BREAKPOINT SUL CROMOSOMA 13 CADE ALLINTERNO DEL BAC 1140C18

29 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH XI 13 12 11.2 12 13 14 21 22 31 32 33 34 13.3 13.2 13.1 12 13.1 13.2 13.3 13.4 19 14 21 22 31 32 33 34 13 12 11.2 12 13 14 13.3 RP11-1140C18 RP11-976L2

30 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19 presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH. tre segnali individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in questo caso dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma normale e un segnale su ciascun derivativo. per abbreviare i tempi si puo eseguire una coibridazione marcando contemporaneamente due o tre sonde di DNA con diversi fluorocromi. Cy3 Fluor-X Cy5

31 By NA Evidenziare i breakpoints mediante la FISH Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19 presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH. tre segnali individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in questo caso dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma normale e un segnale su ciascun derivativo. per abbreviare i tempi si puo eseguire una coibridazione marcando contemporaneamente due o tre sonde di DNA con diversi fluorocromi. Cy3 Fluor-X Cy5


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