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T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Preparazione di DNA cellulare totale da una coltura di batteri.

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Presentazione sul tema: "T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Preparazione di DNA cellulare totale da una coltura di batteri."— Transcript della presentazione:

1 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Preparazione di DNA cellulare totale da una coltura di batteri

2 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007

3 Raccolta di batteri mediante centrifugazione

4 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Preparazione di un estratto cellulare

5 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Due diversi approcci alla purificazione del DNA

6 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Rimozione dei contaminanti proteici mediante estrazione con fenolo

7 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Purificazione del DNA mediante Cromatografia a scambio ionico

8 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Raccolta del DNA mediante precipitazione in etanolo

9 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Preparazione di un lisato chiarificato

10 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007

11 Purificazione dei plasmidi con il metodo della denaturazione alcalina

12 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Centrifugazione in gradiente di densità di cloruro di cesio (CsCl)

13 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Parziale svolgimento della doppia elica di DNA per intercalazione di EtBr fra coppie di basi adiacenti. La molecola normale di DNA rappresentata a sinistra è svolta parzialmente dallintercalazione di quattro molecole di EtBr ed assume la struttura stirata rappresentata a destra.

14 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Purificazione di DNA plasmidico mediante centrifugazione in gradiente di densità EtBr-CsCl

15 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Preparazione di una sospensione di fagi da una coltura infettata di batteri

16 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Induzione di un ciclo lisogeno mediante trasferimento da 30°C a 42°C

17 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Raggiungimento del giusto equilibrio fra età della coltura e dimensioni dellinoculo durante la preparazione di uun campione di fago non lisogeno

18 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Raccolta di particelle fagiche mediante precipitazione con polietilen glicol (PEG) Il PEG è un composto polimerico a catena lunga che, in presenza di sali, assorbe acqua, provocando così la precipitazione di complessi macromolecolari come le particelle fagiche. Il precipitato può essere quindi raccolto mediante centrifugazione e risospeso nel piccolo volume desiderato.

19 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Purificazione di particelle di fago mediante centrifugazione in gradiente di CsCl

20 T. A. Brown, BIOTECNOLOGIE MOLECOLARI, Zanichelli editore S.p.A Copyright © 2007 Preparazione di DNA a singolo filamento di M13 da una coltura di batteri infettata


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