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STUDIO DELLA STRUTTURA E DELLA SIMMETRIA DI UN ENZIMA TRAMITE MUTAGENESI La tirosil-tRNA sintetasi ha delle interessanti proprietà connesse alla sua simmetria:

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2 STUDIO DELLA STRUTTURA E DELLA SIMMETRIA DI UN ENZIMA TRAMITE MUTAGENESI La tirosil-tRNA sintetasi ha delle interessanti proprietà connesse alla sua simmetria: Sebbene lomodimero sia simmetrico nel cristallo, esso in soluzione lega solo una mole di tirosina e forma una sola mole di tirosil adenilato. Questo fenomeno, che va sotto il nome di half of the sites reactivity è stato studiato tramite ingegneria proteica per sapere se lasimmetria funzionale fosse indotta dal legame con i substrati o se fosse preesistente.

3 DELEZIONE DEL DOMINIO C-TERMINALE

4 COSTRUZIONE DEGLI ETERODIMERI

5 SEPARAZIONE DEGLI ETERODIMERI

6 Una seconda mutazione H45N può essere introdotta in una delle due subunità degli eterodimeri per ridurre drasticamente la velocità di attivazione della tirosina in quella subunità. I risultati mostrano che sebbene il tRNA si leghi alla subunità di dimensioni normali, la sua acilazione avviene nellaltra subunità

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8 Lasimmetria è preesistente nellenzima in soluzione 0,5 moles of Tyr-AMP are formed at wild-type rate 0,5 moles at mutant rate = subunità attiva = subunità inattiva Se lasimmetria fosse indotta dalla formazione del Tyr-AMP, allora questo si formerebbe e sarebbe presente solo nelle subunità selvatiche, al contrario di quanto si osserva. Inoltre si formerebbe solo una mole alla velocità del selvatico (wild type rate).

9 Subtilisina


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