Stato dell’ arte e nuove prospettive nel trattamento della Celiachia al 30 Aprile 2011 Luigi Greco European Laboratory for Food Induced Research Dipartimento di Pediatria UNINA Federico II European Laboratory for Food Induced Research Federico II

Ma.. Si può resistere ? European Laboratory for Food Induced Research Federico II

Alternative alla dieta aglutinata Terapia enzimatica (digestione dei peptidi tossici della gliadina) Permeabilità intestinale (antagonisti della zonulina) Blocco della tTGasi o del recettore HLA Inibizione attività citochine infiammatorie (IL15,IFγ) Induzione della tolleranza verso il glutine (vaccino) Grani “detossificati” o modificati Lievitazione IN Around

European Laboratory for Food Induced Research Federico II SPERANZE PER LA TERAPIA

Ludwig Sollid ha descritto ‘la tasca’ dell’ HLA necessaria alla presentazione European Laboratory for Food Induced Research Federico II

Bob Anderson e Carmen Gianfrani hanno una fiala di vaccino….. Ma… persone diverse riconoscono peptidi diversi e non tutti possono stare nel vaccino Bambini riconoscono peptidi diversi da adulti E.. l’ Immunità Innata prima del riconoscimento ???

Peptide Immune Therapy: Proof of Principle Administration of Pathogenic T-Cell Epitopes Il problema fondamentale è identificare il repertorio dei principali peptidi riconosciuti dalle cellule T e capaci di generare ‘immunità protettiva’

Immunodominant Gliadin Peptides in Adult DQ2+ Celiac Patients  -gliadin ω-gliadin  -gliadin Camarca et al J Immunol 2009

mer mer peptide (  M) IFN-  (pg/ml) QLQPFPQPQLPYPQPQP LQLQPFPQPQLPYPQPQLPYPQPQLPYPQPQPF 33-mer 17-mer 33-mer 17-mer 17-mer is the Minimal Immunodominant Peptide with the Same Stimulatory Capacity of 33-mer PFPQPQLPY DQ2- a -I - a -I -  -I PQPQLPYPQ PYPQPQLPY DQ2- a -IIIDQ2- a -IIIDQ2-  -III DQ2- a -I - a -I -  -II

DQ2-  -I is a Novel DQ2-Restricted Epitope from  -Gliadins DQ2-  -I DQ2- ω- I QLQPFPQPQLPYPQPQP QPQQPFPQPQQPFPWQP  -IFN pg/ml DQ2-  -I DQ2-  -I  -IFN pg/ml DQ2-  -I TCLDQ2-  -I/III TCC

THE SAFETY, TOLERANCE, PHARMACOKINETIC AND PHARMACODYNAMIC EFFECTS OF SINGLE DOSES OF AT-1001 IN COELIAC DISEASE SUBJECTS: A PROOF OF CONCEPT STUDY B.M. PATERSON*, K. M. LAMMERS, M.C. ARRIETTA, A. FASANO J.B. MEDDINGS ECCO LA PRIMA PILLOLA !!! European Laboratory for Food Induced Research Federico II Inibire il passaggio tra cellula e cellula, la permeabilità inter-cellulare, chiudere il passaggio !

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7 GIORNI DI PROVA ?? CE NE VOGLIONO ALMENO 60 GIORNI !! European Laboratory for Food Induced Research Federico II Zonulina ??? … no grazie !!!

Proc Natl Acad Sci U S A September 29; 106(39): Identification of human zonulin, a physiological modulator of tight junctions, as prehaptoglobin-2 Amit Tripathi, a Karen M. Lammers, a Simeon Goldblum, a Terez Shea-Donohue, a Sarah Netzel-Arnett, b Marguerite S. Buzza, b Toni M. Antalis, ab Stefanie N. Vogel, ac Aiping Zhao, a Shiqi Yang, a Marie-Claire Arrietta, c Jon B. Meddings, d and Alessio Fasano a1 Le Aptoglobine sono state scoperte 55 anni fa e ne è stata ben studiata la funzione di protezione dell’ Emoglobina, non altro Smithies, O. Zone electrophoresis in starch gels: group variations in the serum proteins of normal human adults. Biochem. J. 61: , Smithies, O. Zone electrophoresis in starch gels: group variations in the serum proteins of normal human adults. Biochem. J. 61: , [PubMed: ]PubMed: Smithies, O., Connell, G. E., Dixon, G. H. Inheritance of haptoglobin subtypes. Am. J. Hum. Genet. 14: 14-21, [PubMed: Smithies, O., Connell, G. E., Dixon, G. H. Chromosomal rearrangements and the evolution of haptoglobin genes. Nature 196: , [PubMed: ]PubMed: Smithies, O., Connell, G. E., Dixon, G. H. Chromosomal rearrangements and the evolution of haptoglobin genes. Nature 196: , [PubMed: ]PubMed: Smithies, O., Walker, N. F. Genetic control of some serum proteins in normal humans. Nature 176: , European Laboratory for Food Induced Research Federico II

Ma, allora, da dove passa la Gliadina tossica nel celiaco ?

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EV Peptidi della gliadina Golgi HLA-DR Peptidi della gliadina HLA-DR Golgi Zimmer et al, GUT 2010 BASTA FARE UNA FOTOGRAFIA !!! Endocitosi della gliadina ed espressione di HLA-DR negli enterociti di pazienti celiaci

Una Pillola per Digerire il Glutine mentre lo mangiamo ? Il più efficiente di noi digerisce(idrolizza) il 92% delle proteine del glutine Rimangono 800/mg per ogni panino !

European Laboratory for Food Induced Research Federico II La somministrazione di una ‘PILLOLA’ Con Endopeptidasi ha stimolato una risposta precoce al glutine in scimmie celiache!!! Gluten free Gluten + EndoPep Anti Gliadin AntiTransglutaminase

San Francesco parlava ai Lieviti ?

Il Criscito del Lattobacillo ‘San Franciscanensis’

Abbiamo prodotto, dopo 6 anni di fallimenti, una farina di grano con meno di 6 ppm di glutine ! Secondo la tradizione, facendo poi biscotti, pasta, panini ecc.

Gobetti et al described the hydrolysis of various gliadin Pro-rich peptides, including the 33-mer, by lactobacilli from natural sourdoughs yeast, that were able to induce an almost complete hydrolysis of the gliadin peptides. Di Cagno et al. Sourdough Bread Made from Wheat and Nontoxic Flours and Started with Selected Lactobacilli Is Tolerated in Celiac Sprue Patients. Appl Environ Microbiol Feb;70(2): Hydrolysis of peptides by pooled cells (109 CFU/ml) and CE (2.42 mg of protein/ml) of the four selected lactobacilli. Analysis of the prolamin protein fractions of different doughs made of a mixture of wheat (30%), oat (10%), millet (40%), and buckwheat (20%) flours European Laboratory for Food Induced Research Federico II

Challenge with native gluten EMAAnti-tTG Intestinal permeabilityCD3  CD25 A.At 0Negative5,60,25T021,661 t 30 Light positivity12,4 0.12T159,615,320 A.At 0Negative1,70,05 T t 30Positive18, T280,818,524 S.C.t 0 Negative 1,6n.d.T0 t 60Positive>200n.d.T3b F-It30 Light positivity1-9n.d.T t60Positive111.4 n.d. (iron load, steatocrit and fecal calprotectin normal) T3b Tutti hanno sviluppato Antiorpi Anti Transglutaminasi dopo 60 gg di glutine Tutti hanno manifestato infiammazione della mucosa intestinale. European Laboratory for Food Induced Research Federico II

Table 3 Serology, morphometric and immunohistochemistry analyses of celiac disease patients during challenge with extensively hydrolyzed baked good (S1BG) = 95% TimeEMAtTGMarsh Grade Vh/C d CD3 TCR  δ CD25 S.A.t0t0 Negative0.5T t 60 Negative0.5T3a P.M.t0t0 Negative1.7T t 60 Light positivity 9.2T

Infiltrazione Intraepiteliale CD3 Prima e dopo il Glutine Predigerito al 95%

European Laboratory for Food Induced Research Federico II Table 4 Serology, morphometric and immunohistochemistry analyses of celiac disease patients during challenge with fully hydrolyzed baked good (S2BG) = 99,5%. TimetTGMarsh Grade Villus/Cr ipt CD3TCR γ δCD25 F.I.t0t0 1.6T t T I.C. t0t0 1.9T t T R.R. t0t0 0.3T t T I.I.t0t0 0.5T t T C.C.t0t0 0.4T t T

Infiltrazione Intraepiteliale CD3 Prima e dopo il Glutine Trattato

Mucosa Intestinale prima e dopo 90 giorni di biscotti di grano trattato European Laboratory for Food Induced Research Federico II

Mucosa Intestinale prima e dopo 90 giorni di biscotti di grano trattato

CONCLUSIONI Siamo riusciti ad ottenere una buona farina dopo aver distrutto il glutine La fermentazione con il lievito del ‘criscito’ San Franciscanensis ha ridotto il glutine sotto le tracce tossiche(<20 ppm). Pane e biscotti fatti con questa farina non hanno prodotto alcun danno a pazienti che li hanno mangiato per 60 giorni in dosi abbondanti European Laboratory for Food Induced Research Federico II

NE PONNO CCHIU’ GLI UOCCHIE………. …CA E’ SCUPPETTATE !!!

Ora bisogna cambiare in base a tre semplici considerazioni : 1. Le 'tracce' debbono essere qualcosa di misurabile e consistente, non 'un timore'. In pratica vi sono limiti ben definiti dal 'Codex Alimentarius' europeo (dello 0.2%), che sono decine di volte inferiori alle quantità di glutine capaci di dare una qualche sensibilità nel soggetto celiaco. 1. La scelta 'SENZA GLUTINE' è positiva, non proibitiva, in quanto i prodotti senza glutine sono di qualità nutrizionale MIGLIORE di quelli con il glutine. 2.Il fanatismo delle tracce di glutine ha già indotto varie centinaia di celiaci adolescenti, ad abbandonare seriamente la dieta, che deve essere sì senza glutine, ma non può essere una irrazionale condanna ad una vita difficile.

UN ESEMPIO DAI FARMACI Se una compressa di ASPRO contiene 500 milligrammi di Aspirina e 100 milligrammi di amido di frumento bisogna ingoiare 10 compresse di ASPRO per ingerire 1 grammo di amido, nel quale potranno essere presenti al massimo, circa 2.1 milligrammi di proteine, dei quali 1 milligrammo circa potrebbero essere composto da glutine. Quantità irrisoria, molte volte inferiore al minimo tollerabile, per la quale non è mai stata documentata alcuna sensibilità nei celiaci. In pratica non vi sono farmaci che, alle dosi terapeutiche, forniscano quantità rilevanti di glutine Stesso discorso per gli oli di semi, per lo sciroppo di glucosio e per alcuni rischi di lavorazione di salumi.

Ci vogliono 500 compresse per fare una dose pericolosa di glutine !!!!

Gelato contaminato con 1% del peggiore Amido di Frumento 100 grammi di gelato contengono 1 gr (1000 ppm) di Amido di Grano 1000 mg di amido di grano non purificato né modificato contengono 0,3% di proteine = 3 mg Dei 3 mg di proteine il 70% può essere glutine = 2 mg La dose minima possibilmente tossica è di 50 mg ogni giorno per 90 giorni !!!!!

Bisogna mangiare 25 gelati per avere la dose minima di 50 mg di glutine

Ma non per un giorno solo ! Per 90 giorni TUTTI I GIORNI !!!!

DIETA e CELIACHIA Potreste mai immaginare che per digerire la pasta senza glutine il nostro stomaco impiega un'ora in meno di quanto è necessario per la pasta tradizionale? Diapositive del Dr. Basilio Malamisura Responsabile del Centro della Celiachia della ASL SA1

La Pasta Senza Glutine svuota dallo stomaco 45 minuti prima della Pasta col Glutine

La Pasta Senza Glutine provoca una risposta insulinemica più bassa e prolungata

La Pasta Senza Glutine provoca una fermentazione colonica del 18% inferiore a quella provocata dalla Pasta con Glutine

Il glutine, una strana molecola, somiglia forse ad virus ? Il cacciatore, di cui condividiamo il 98% dei geni, usa solo la sua immunità innata per sopravvivere. E’ ora ingannato da una strana sequenza molecolare ?

Celiaquie ? Un ‘Inganno’ ai sistemi naturali di difesa ? Il ‘malato’ è il glutine, amplificato enormemente dall’uomo per farne commercio

European Laboratory for Food Induced Research Federico II Vivere Sani e Felici Senza Glutine !

Siete pronti ??? Cerco volontari !!! European Laboratory for Food Induced Research Federico II