Spegnimento di Fluorescenza

La fluoresceina è la prima molecola fluorescente di sintesi : Adolf von Beyer 1871 L’emissione di fluorescenza avviene ad una l maggiore di quella di assorbimento (legge di Stokes)

Spettro di eccitazione di fluorescenza Spettro di eccitazione di fluorescenza con osservazione a 430 nm spettri di emissione di fluorescenza Detersivo con sbiancanti ottici : assorbono nell’UV ed emettono nel visibile

L’emissione di fluorescenza avviene ad una l maggiore di quella di assorbimento, perciò è possibile, semplicemente con l’uso di filtri, separare la luce di emissione da quella della sorgente usata per l’eccitazione. Siccome l’osservazione si fa contro uno sfondo “nero” si ha in pratica una sensibilità molto maggiore che nella normale spettroscopia di assorbimento (sensibilità di 10-12 M). Inoltre se solo un tipo di molecola di una miscela è fluorescente, essa viene osservata selettivamente. Anche in presenza di più specie fluorescenti si può condurre una osservazione selettiva selezionando opportunamente la l di eccitazione.

Dipendenza dell’intensità di emissione di fluorescenza dalla concentrazione NON VALE LA LEGGE DI LAMBERT-BEER che vale per l’assorbimento: A= ecb perché la relazione tra A e intensità di fluorescenza non è lineare L’intensità della luce assorbita dalle molecole è: L’intensità di fluorescenza varia linearmente con l’intensità assorbita, con fattore di proporzionalità fF: resa quantica di fluorescenza assoluta (<1)

Decadimento non radiativo Decadimento radiativo= Fluorescenza Assorbimento Decadimento non radiativo Decadimento radiativo= Fluorescenza Reazione fotochimica

nucleo chinolinico fluorescente nm nucleo chinolinico fluorescente E’ utilizzata nell’acqua tonica Boris Johnson ministro degli esteri britannico In una distilleria di gin a Londra

Decadimento radiativo (fluorescenza) e non radiativo La fluorescenza è un processo con cinetica del primo ordine: F* F + hn anche il decadimento non radiativo è un processo con cinetica del primo ordine F* F + calore

Spegnimento (quenching) di fluorescenza In presenza di atomi con molti elettroni, es. alogenuri o metalli pesanti, avviene una perdita di fluorescenza, detta quenching (spegnimento) di fluorescenza dinamico, indotta dalla collisione diffusionale tra fluorofori eccitati (F*) e molecola/atomo quencher (Q). Questo decadimento avviene con una cinetica del secondo ordine. Il rapporto tra intensità di fluorescenza in assenza (IF) ed in presenza di quencher IFQ è: KSV: costante di Stern Volmer [Q]: concentrazione del quencher