Per l'estrazione abbiamo utilizzato 3 alimenti e la mucosa orale:

Metodica dei 3 alimenti FASE 1. Preparazione della soluzione di estrazione (rottura delle membrane cellulari) FASE 2. Digestione delle proteine FASE 3. Precipitazione del DNA

FASE 1 In un beker da 250 mL preparare 3 g di cloruro di sodio (NaCl) e 10 mL di detergente; Aggiungere acqua sino ad un volume di 100 mL, amalgamare; Pesare 100 g dell’alimento utilizzato per l’analisi, sminuzzarlo; Versare la poltiglia ottenuta in un beker e aggiungere la soluzione di estrazione;

Lasciare in bagnomaria a 60° per 15’ (mescolare ogni tanto); Terminato il tempo prelevare il beker e mescolare; Raffreddare in bagno di ghiaccio (acqua+ 6-7 cubetti di ghiaccio); Filtrare con un colino il preparato all’interno di un beker pulito.

FASE 2 Prelevare 5 mL di filtrato e porlo in una provetta da 15 mL; Aggiungere 1 mL di succo d’ananas; Attendere 5’.

FASE 3 Sotto cappa, prendere un volume di etanolo freddo uguale a quello del filtrato più quello dell’ananas (6mL); Versare con cura lungo il bordo della provetta; Aspettare che termini la liberazione di gas e osservare il fenomeno.

Per la MUCOSA ORALE il procedimento è analogo con qualche variazione nelle quantità …

FASE 1 In un beker da 250 mL preparare 2 g di cloruro di sodio (NaCl) e 10 mL di detergente; Aggiungere acqua sino ad un volume di 90 mL, amalgamare; Masticare all’interno della guancia 3 mL di H2O per 30-40” sciacquando vigorosamente Espellere l’H2O in una provetta e aggiungere la soluzione di estrazione fino a raddoppiare il volume ottenuto dopo il risciacquo.

Tappare la provetta e ruotarla lentamente per 5 volte; Lasciare in bagnomaria a 60° per 15’ (mescolare ogni tanto); Terminato il tempo prelevare il beker e mescolare; Raffreddare in bagno di ghiaccio (acqua+ 6-7 cubetti di ghiaccio).

FASE 2 Aggiungere 1 mL di succo d’ananas; Attendere 5’.

FASE 3 Sotto cappa, prendere un volume di etanolo freddo uguale a quello del filtrato più quello dell’ananas (5mL); Versare con cura lungo il bordo della provetta; Aspettare che termini la liberazione di gas e osservare il fenomeno.

FUNZIONI DELLE SOSTANZE e DELLE TEMPISTICHE ADOPERATE FASE 1 CLORURO DI SODIO: si scinde negli ioni Na⁺ e Cl⁻ che provvedono alla rottura chimica delle membrane; DETERGENTE: ha componente lipidica analoga a quella delle membrane ed è perciò in grado di lederle; BAGNOMARIA: poichè non si può scaldare direttamente il beker si procede in questa maniera, è indispensabile assicurarsi di non mantenere il beker in immersione per troppo o troppo poco tempo (nel primo caso il DNA verrebbe alterato, nel secondo non si romperebbero gli enzimi che lo tengono unito); BAGNO DI GHIACCIO: il protrarsi dell’alta temperatura dopo il riscaldamento danneggerebbe la struttura del DNA.

FUNZIONI DELLE SOSTANZE e DELLE TEMPISTICHE ADOPERATE FASE 2. SUCCO D’ANANAS: contiene BROMELINA, una sostanza che demolisce le proteine e libera il DNA dai legami con gli istoni; FASE 3. ETANOLO FREDDO: il DNA non è solubile in etanolo quindi risulta ben visibile, inoltre le diverse densità dei solventi fanno sì che esso “risalga” e si vada a localizzare nell’etanolo stesso.

BANANA

POMODORO

FEGATO DI POLLO

MUCOSA ORALE

LICEO SCIENTIFICO "A. ROITI" di FERRARA Classe 3B NUOVO ORDINAMENTO Piazzi Leonardo Ranzani Angelica Rimondi Arianna Rizzi Camilla Scapoli Elisa Sovrani Daniele Tafuro Alessandra Tiozzo Bon Giulia Tosi Giulia Trevisani Nicola Vignali Laura Vitali Martina Zucchini Ludovica Alberghini Marco Berveglieri Annarita Caruso Riccardo Castellini Riccardo Cutrì Angela Gatti Michele Giuliani Luca Malanchini Eva Martinelli Fabio Mazzoni Alessandro Mistretta Anna Monesi Federico Moro Edoardo Oberdan Andrea Assistente Tecnico di Laboratorio: dott.ssa Giovannini Luciana Docente di Chimica e Biologia della classe: prof.ssa Modestino M. Letizia Anno Scolastico 2013-2014 LICEO SCIENTIFICO "A. ROITI" di FERRARA 19

SI RINGRAZIANO PER LA PRESENTAZIONE: Angelica Ranzani Riccardo Caruso Elisa Scapoli Eva Malanchini