Spettrofotometria Il monocromatore
[I] Spettrofotometro Lungo il cammino ottico all’interno Sorgente di luce Prisma o reticolo ottica fenditura Campione da misurare Rivelatore fotometrico lettura [I] [I0] Lungo il cammino ottico all’interno del campione i fotoni vengono assorbiti e l’intensità della luce cala in maniera esponenziale con la lunghezza del cammino ottico Trasmittanza, T%, Percentuale di luce, fotoni, che raggiunge il rivelatore rispetto al raggio non assorbito X, distanza percorsa all’interno del campione
Schema ottico di uno spettrofotometro
L’ASSORBANZA
Abs = e l c e : coefficiente di estinzione La legge di Lambert-Beer stabilisce che la concentrazione di una soluzione, contenente una sostanza capace di assorbire energia radiante, risulta direttamente proporzionale all'Assorbanza della soluzione stessa ed inversamente proporzionale al logaritmo della Trasmittanza percentuale. e : coefficiente di estinzione l : cammino ottico nella soluzione (1 cm) c : concentrazione della sostanza Abs = e l c T% Abs Concentrazione della sostanza Concentrazione della sostanza
Schema ottico di uno spettrofotometro
Spettro di assorbimento della fenolftaleina 10mg/l In condizioni acide (------) e basiche (------) e550nm1% = 1350 1,2 0,9 Assorbanza, Absu 0,6 0,3 350 430 510 590 670 750 Lunghezza d’onda, nm