RICKETTSIOSI ed EHRLICHIOSI EZIOLOGIA e DIAGNOSI DI LABORATORIO Dott.ssa Valentina Ebani Dip. Patologia Animale, Profilassi e Igiene degli Alimenti Facoltà di Medicina Veterinaria Università di Pisa

Parassiti intracellulari obbligati EZIOLOGIA BATTERI  Gram negativi Giemsa Gimenez  Pleomorfi coccoidi/elissoidali Parassiti intracellulari obbligati liberi nel citoplasma in vacuoli intracitoplasmatici (Rickettsie) (Ehrlichie)

ZECCHE CELLULE BERSAGLIO CELLULE EMATOPOIETICHE CELLULE MATURE O IMMATURE ENDOTELIALI Ehrlichie Rickettsie TRASMISSIONE TRAMITE VETTORI INVERTEBRATI ZECCHE

PRECEDENTE CLASSIFICAZIONE ORDINE RICKETTSIALES Famiglia RICKETTSIACEAE Tribù Rickettsieae Genere Rickettsia Tribù Ehrlichieae Genere Ehrlichia Generi Coxiella Cowdria Neorickettsia Famiglia ANAPLASMATACEAE Generi Anaplasma Aegyptianella Haemobartonella Eperythrozoon Famiglia BARTONELLACEAE Genere Bartonella

STUDI GENOMICI SU Gene 16S rRNA Gene groESL Geni che codificano per proteine di membrana

ATTUALE CLASSIFICAZIONE ORDINE RICKETTSIALES Famiglia RICKETTSIACEAE Genere Rickettsia Genere Orientia Famiglia ANAPLASMATACEAE Genere Anaplasma Genere Ehrlichia Genere Neorickettsia Genere Wolbachia Genere Cowdria

FAMIGLIA RICKETTSIACEAE TYPHUS GROUP SPOTTED FEVER GROUP Rickettsia Orientia tsutsugamushi R. prowatzekii R. typhi R. canadensis R. rickettsii R. conorii R. felis R. helvetica R. akari R. sibirica

entrata moltiplicazione rilascio

Rickettsia rickettsii FEBBRE DELLE MONTAGNE ROCCIOSE ROCKY MOUNTAIN SPOTTED FEVER (RMSF) Ixodes ricinus

Rickettsia rickettsii

Rickettsia conorii FEBBRE BOTTONOSA DEL MEDITERRANEO Rhipicephalus sanguineus

Rickettsia felis Rickettsia typhi CANE GATTO Ctenocephalides felis !?

FAMIGLIA ANAPLASMATACEAE A. phagocytophila A. platys A. marginale A. bovis Anaplasma Ehrlichia Neorickettsia E. canis E. chaffeensis E. ewingii E. muris E. ruminantium N. risticii N. sennetsu N. helminthoeca

entrata moltiplicazione rilascio

Ehrlichia canis EHRLICHIOSI MONOCITICA “PANLEUCOPENIA TROPICALE CANINA” Rhipicephalus sanguineus MONOCITI

Ehrlichia chaffeensis EHRLICHIOSI MONOCITICA MONOCITI Ehrlichia ewingii EHRLICHIOSI GRANULOCITICA GRANULOCITI

Anaplasma phagocytophila “EHRLICHIOSI” GRANULOCITICA Ixodes ricinus

Neorickettsia risticii EHRLICHIA MONOCITICA “POTOMAC HORSE FEVER” MONOCITI

DIAGNOSI DI LABORATORIO

DIAGNOSI INDIRETTA Immunofluorescenza indiretta “gold standard” Soglia di positività 1:40 Ehrlichie 1:64 Rickettsie SIERO

VANTAGGI: Vetrini IFI per E.canis A. phagocytophila N. risticii R. conorii R. rickettsii R. typhi R. prowazekii Dip. Patologia Animale, Profilassi e Igiene degli Alimenti - Pisa SVANTAGGI: Attrezzatura Lettura

ALTRI TEST SIEROLOGICI E. canis KIT COMMERCIALI Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) ANTIGENI whole cell Proteine ricombinanti (p30 p30-1) Proteina ricombinante (rMAP2)

CANI CON EHRLICHIOSI IN FASE NON ACUTA HANNO TITOLI ANTICORPALI BASSI SENSIBILITA’ KIT Ridotta con titoli anticorpali 1:40 – 1:80 CANI CON EHRLICHIOSI IN FASE NON ACUTA HANNO TITOLI ANTICORPALI BASSI

PROBLEMA CROSS-REAZIONI NON CONFONDERE LE CROSS-REAZIONI CON LE CO-INFEZIONI Frequenti le co-infezioni legate allo stesso vettore E. canis / R. conorii A. phagocytophila / R. rickettsii

DIAGNOSI DIRETTA Ehrlichiosi STRISCIO buffy coat sangue da vasi capillari aspirato tissutale da milza , polmone, linfonodi (E. canis)

Su stipite isolato sono possibili studi spr di ordine epidemiologico ISOLAMENTO difficoltà di esecuzione linee cellulari diverse laboratorio di classe 3 (eccetto E. canis) Su stipite isolato sono possibili studi spr di ordine epidemiologico

DIAGNOSI MOLECOLARE Sangue in EDTA buffy coat Tessuti Estrazione DNA Polymerase chain reaction (PCR) Utilizzo di primer diversi a seconda dell’agente eziologico ricercato

E. canis E. chaffeensis A. phagocytophila N. risticii Rickettsia spp. Presso Dip. Patologia Animale, Profilassi e Igiene degli Alimenti, Università di Pisa E. canis E. chaffeensis A. phagocytophila N. risticii Rickettsia spp. sequenziamento

CONCLUSIONI Diversi agenti responsabili di ehrlichiosi e rickettsiosi nel CANE Sierologia mediante IFI Ausilio offerto da metodiche molecolari