Metodi di osservazione dei microrganismi
Le dimensioni dei microrganismi 1mm = 0,001mm 1nm = 0,000001mm 1A = 0,0000001 mm
Limite di risoluzione dell’occhio umano (a 25 cm): 0,2 mm
Microscopio elettronico Microscopio ottico Microscopio elettronico
I microscopi ottici microscopi semplici: un solo sistema di lenti (lenti di ingrandimento, i primi microscopi…); microscopi composti: due sistemi di lenti (i microscopi moderni con obiettivi e oculari) Nei microscopi ottici la fonte di illuminazione è una radiazione con lunghezza d’onda relativamente lunga (visibile 400-700 nm o ultravioletta nei microscopi a fluorescenza). Questo limita il potere di risoluzione che è direttamente proporzionale alla lunghezza d’onda e inversamente proporzionale all’indice di rifrazione e all’apertura numerica dell’obiettivo
Anatomia di un microscopio stativo fonte di illuminazione fotocamera o telecamera oculari diaframma di campo revolver con obiettivi tavolino traslatore vite macrometrica e micrometrica condensatore
Ingrandimento
La luce visibile
Risoluzione e ingrandimento
POTERE DI RISOLUZIONE vs INGRANDIMENTO A=1 nel migliori microscopi
Il limite di risoluzione dei microscopi l: lunghezza d’onda della luce N: indice di rifrazione del mezzo interposto fra lente e preparato a: semiangolo della lente dell’obiettivo = ~0,25mm l: è 400-700 nm per la luce visibile N: è 1 quando il mezzo interposto fra lente e preparato è l’aria a: nelle lenti migliori si avvicina ad 1
Il limite di risoluzione dei microscopi Il limite di risoluzione può essere migliorato (diminuito): diminuendo l (200-400 nm per la luce UV) aumentando il prodotto Nsena (apertura numerica, NA) per esempio interponendo fra obiettivo e campione un olio con un indice di rifrazione simile a quello del vetro (1,518) = ~0,16mm
Microscopio ottico in campo oscuro Campo chiaro Campo oscuro Treponema pallidum
Microscopio ottico a fluorescenza
Microscopio elettronico
Gli elettroni si comportano come onde La lunghezza d’onda degli elettroni è di 0,1-0,04 nm
Fonte di elettroni Condensatore Campione Obiettivo Lente del proiettore Fascio di elettroni Immagine sullo schermo fluorescente Immagine sullo schermo televisivo Microscopio elettronico a trasmissione a scansione Deviazione degli Detector
Microscopio elettronico a trasmissione Microscopio elettronico a scansione
Microscopio elettronico