Citofluorimetria con anticorpi monoclonali dotati di fluorocromi Permette di riconoscere, selezionare, contare, separare cellule dotate di particolari, specifici antigeni (proteine di membrana), mediante uso di anticorpi complementari forniti di molecole che rendono visibile il complesso cellula-anticorpo se illuminato con fonte luminosa (laser) di particolare frequenza Esempio di laser blu/ 488 nm rosso / 633 nm near-UV /375 nm Descrizione molto superficiale e approssimata della tecnica usata

Le cellule presentano sulla superficie esterna della membrana particolari molecole (proteiche o glicoproteiche) specifiche per ogni tipo cellulare, che possono permettere di distinguerle quando si trovino assieme a cellule di altro tipo: antigeni specifici di membrana Esistono anticorpi , molecole proteiche naturali prodotto dal sistema immunitario, complementari per specifici antigeni cellulari: tali anticorpi possono legarsi alle cellule che vengono riconosciute come portatrici degli antigeni specifici . Si possono ottenere in laboratorio grandi quantità di anticorpi di un determinato tipo, anticorpi monoclonali, che possono essere forniti di particolari sostanze di diverso colore ,fluorocromi, quando siano trattate con particolari fonti lumininose (laser ) con diversa lunghezza d’onda .

Anticorpo con fluorocromo rosso Anticorpo con fluorocromo viola Anticorpo con fluorocromo blu Anticorpo con fluorocromo verde Cellule con antigene, molecola proteica o glicoproteica, su membrana cellulare, riconoscibile da molecola di anticorpo specifica, complementare ( fornita di sostanza colorata, fluorocromi, di vario colore)

Trattando una popolazione cellulare formata da vari tipi di cellule con anticorpi monoclonali forniti di fluorocromi si ottiene un insieme di cellule riconoscibili per la colorazione indotta dall’anticorpo collegatosi: uno strumento, citofluorimetro, permette rapidamente di contare e separare i diversi tipi cellulari in funzione della colorazione assunta Cellule tumorali e cellule sane

Cellule riconoscibili per il colore dell’anticorpo legato Cellule normali

Cellule riconoscibili per il colore dell’anticorpo legato

Cellule riconoscibili per il colore dell’anticorpo legato separate e disponibili per esami ulteriori

Cellule riconoscibili per il colore dell’anticorpo legato separate e disponibili per esami ulteriori

Cellule tumorali colorate e sane incolori

Popolazione cellulare separata

Popolazione cellulare separata

Cellule separate e coltivate in laboratorio

La separazione delle singole cellule di un certo tipo può avvenire inserendo ogni cellula in una gocciolina fluida successivamente elettrizzabile: quando le goccioline fluiscono in presenza di un campo elettrico possono essere separate in gruppi distinti - + + + - - Inserimento di cellule in singole goccioline Popolazione mista con due tipi cellulari - + Assegnazione di carica elettrica alle goccioline

quando le goccioline fluiscono in presenza di un campo elettrico possono essere separate in gruppi distinti - + + + - - - + - +