Proteina intatta 1 2 3 4 Ala-Leu-Thr-Pro ... ... ... ... 1 2 3 4 Ala-Leu-Thr-Pro ... ... ... ... Endoproteinasi Arg-C 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 a) Ile-Lys-Val-Trp-Glu-Gly-Thr-Gly-Leu-Val-Pro-Arg 1 2 3 b) Ser-Thr-Val 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 c) Ala-Leu-Thr-Pro-Val-Ser-Glu-Met-Val-Arg Endoproteinasi Glu-C d) Gly-Thr-Gly-Leu-Val-Pro-Arg-Ser-Thr-Val 1 2 3 4 5 6 7 e) Ala-Leu-Thr-Pro-Val-Ser-Glu 1 2 3 4 5 6 7 8 f) Met-Val-Arg-Ile-Lys-Val-Trp-Glu Allineamento per sovrapposizione zone comuni: f) Met-Val-Arg-Ile-Lys-Val-Trp-Glu a) Ile-Lys-Val-Trp-Glu-Gly-Thr-Gly-Leu-Val-Pro-Arg d) Gly-Thr-Gly-Leu-Val-Pro-Arg-Ser-Thr-Val b) Ser-Thr-Val Sequenza: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 Ala-Leu-Thr-Pro-Val-Ser-Glu-Met-Val-Arg-Ile-Lys-Val-Trp-Glu-Gly-Thr-Gly-Leu-Val-Pro-Arg-Ser-Thr-Val ____________________________ ___________ ____________________ ___________________________ ___________
Anno Quantita' Tempo 196O 10 g 3 anni 1970 1 g 1 anno 1980 1 mg 1 settimana 1990 0.05 mg 1 giorno 2000 0.02 mg 1 giorno Quantita' e tempi richiesti negli anni per sequenziare un peptide di 50 residui amminoacidici
Sequenziatore automatico di peptidi Applied Biosystem Procise 492 che opera secondo il metodo di Edman della degradazione con fenilisotiocianato
Schema di un sequenziatore di peptidi
Spettrometro di massa
Standard PTH-a.acidi Degradazione di Edman
Primo passo degradazione Edman Peptide singolo
Secondo passo degradazione Edman Peptide singolo
Degradazione di Edman su miscela di peptidi Tre passi