Glivec®

MECCANISMO D’AZIONE DEL GLIVEC Imatinib è un inibitore competitivo di alcune proteine ad attività tirosinochinasica, quali Abl, il recettore per il fattore di crescita di derivazione piastrinica β (PDGF-R β) e i prodotti del protoncogene c-KIT. Agisce unendosi al sito di legame dell’ATP con conseguente blocco della fosforilazione dei substrati,  creando un arresto della cascata di segnale e aumentando il  numero di cellule che entrano in apoptosi.

Meccanismo semplificato dell’azione del glivec (STI57I) nella leucemia mieloide cronica L’inibizione è di tipo allosterico con formazione di legami idrogeno tra il Glivec ed il sito attivo della bcr-abl PTK 3

Strutture molecolari Imatinib Imatinib deuterato (Standard Interno) L’imatinib è un fenilamminopirimidina derivato ed è un inibitore altamente selettivo della famiglia delle tirosin-chinasi che comprende bcr-abl (Leucemia mieloide cronica), c-kit (GIST) e PDGFRα. Nella quantificazione tramite HPLC-MS/MS viene usato come standard interno l’Imatinib deuterato. Imatinib deuterato (Standard Interno) CGP74588 (metabolita principale) 4

Trasformazione nel metabolita principale Imatinib CGP74588 La demetilazione dell’enzima epatico è la principale via di metabolizzazione del farmaco ma giocano un ruolo minore anche gli enzimi CYP3A5, CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19 e CYP2D6. In letteratura infatti in letteratura l’inibizione dell’enzima CYP3A4 non porta necessariamente ad una mancata produzione del metabolita. Demetilazione: condotta principalmente dall’enzima epatico CYP3A4 5

Curva di calibrazione Conc. Glivec (ng/mL) Curva di calibrazione di un’analisi per la quantificazione del Glivec plasmatico. Il coefficiente di regressione lineare è 0.9996, indice di un’ottima linearità analitica. Sull’asse y vengono riportati i rapporti tra le aree dello Standard Interno e quelle dell’analita (classica quantificazione con Standard Interno) Conc. Glivec (ng/mL) 6

Esempio di cromatogramma CGP74588 Imatinib Nel cromatogramma è possibile evidenziare i 3 picchi di interesse: Il metabolita (CGP74588) con la transizione tipica 480.0  394.0 Lo standard interno con la transizione tipica 502.2  393.8 L’Imatinib con la transizione tipica 494.14  393.8 Imatinib Deuterato 7

Reclutamento pazienti Sospensione trattamento Prelievo ad ogni visita Raccolta dati Nuovi pazienti Responder Evento avverso Prelievo Basale Prelievo Prelievo 28 giorni 3 mesi Cambio dosaggio Sospensione trattamento 6 mesi Prelievo ad ogni visita Uscita studio 12 mesi Prelievo semestrale Protocollo INT 8

Campione Conc. Glivec (ng/mL) % (CGP74588) INT001 1200,3 10,6 INT002 1789,2 10,3 INT003 1101,6 INT004 753,8 11,6 INT005 1482,1 8,3 In questa tabella vengono riportati i valori della concentrazione del glivec e del suo metabolita principale. I dati noti compredono anche l’ora dell’ultima assunzione, questi pazienti hanno preso il farmaco da 21 a 27 ore prima del prelievo. I risultati ottenuti infatti sono paragonabili all’intervallo di concentrazione presente in letteratura allo steady state. 9

Qui è possibile notare la ripetibilità dell’analisi e quindi la precisione del dato, il punto a concentrazione maggiore rappresenta l’analisi di un paziente di cui non era nota l’ora dell’ultima assunzione del farmaco, il confronto con la letteratura del dato parrebbe associarlo al livello massimo della cinetica (assunzione tra le 4 e le 6 ore prima). 10

Farmacogenetica

Ruolo Genetico nella Risposta Individuale al Farmaco Integrating pharmacogenetics and therapeutic drug monitoring: optimal dosing of imatinib as a case-example Li-Wan-Po A, et al. European Journal of Clinical Pharmacology, 2010 Clinical relevance of a pharmacogenetic approach using multiple candidate genes to predict response and resistance to imatinib therapy in chronic myeloid leukemia Kim DH, et al. Clinical Cancer Research, 2009 Population Pharmacokinetics and Pharmacogenetics of Imatinib in Children and Adults Aurélie Petain, et al. Clinical Cancer Research, 2008

SNP Polimorfismo a Singolo Nucleotide Variazione di un singolo nucleotide nella sequenza di DNA Frequenza nella popolazione >1%

Modulano i livelli plasmatici del farmaco SNPs localizzati nei GENI che codificano per proteine coinvolte nel trasporto/metabolismo del farmaco Modulano i livelli plasmatici del farmaco

GENI COINVOLTI NEL TRASPORTO DEL FARMACO ABCB1 ATP-binding cassette, sub-family B (MDR/TAP), member 1 SNP: rs1045642 ABCG2 ATP-binding cassette, sub-family G (WHITE), member 2 SNP: rs2231142 SLC22A1 solute carrier family 22 (organic cation transporter), member 1 SNP: rs683369

GENI DEL METABOLISMO CYP3A4 cytochrome P450, family 3, subfamily A,polypeptide 4 SNP: rs2740574 CYP3A5 cytochrome P450, family 3, subfamily A, polypeptide 5 SNP: rs776746

Livelli Plasmatici di Imatinib Responsività al Farmaco Scopo dello “Studio Osservazionale” Valutare Correlazione tra: SNPs Livelli Plasmatici di Imatinib Responsività al Farmaco

Laboratorio di Endocrinologia Dosaggio GLIVEC Laboratorio di Endocrinologia Secreto G, Cavalleri A, Galli M, Venturelli E, Cogliati P Farmacogenetica s.s. Basi Molecolari del Rischio Genetico, Modelli Poligenici Falvella FS, Dragani TA