RICERCA DI INIBENTI NEL LATTE VACCINO Associazione Italiana Allevatori Laboratorio Standard Latte RICERCA DI INIBENTI NEL LATTE VACCINO 6°Ring Test Specialistico Novembre 2009 Continanza R.,Castellano L. 10° Meeting AIA-LSL Montegrotto Terme (PD)

Ricerca degli inibenti nel latte 2000 Il “Laboratorio Standard Latte” inizia a produrre campioni di Latte Vaccino Liofilizzato contenenti ANTIBIOTICI inseriti nel Ring Test “Routine” NOVEMBRE 2002 Il LSL organizza il 1° RING TEST SPECIALISTICO per la ricerca degli Inibenti nel latte vaccino MAGGIO 2003 2° RING TEST SPECIALISTICO SETTEMBRE 2004 3° RING TEST SPECIALISTICO GIUGNO 2005 4° RING TEST SPECIALISTICO MAGGIO 2007 5° RING TEST SPECIALISTICO NOVEMBRE 2009 6° RING TEST SPECIALISTICO Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL

Perché partecipare ? Laboratori RT Specialistico Produttori Valutare le performance analitiche dei singoli partecipanti in un contesto più ampio sia di campioni, sia di antibiotici. Confrontare le performance di diversi kit disponibili in commercio per la ricerca di inibenti nel latte. RT Specialistico Laboratori Valutare le performance analitiche dei propri prodotti in un ampio contesto di operatori del settore. Produttori Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 3

Organizzazione del Ring Test Progettazione Invito ai clienti Raccolta delle adesioni Allestimento Elaborazione dati Comunicazione risultati ai partecipanti Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 4

6° RT Specialistico Nell’ambito della nostra abituale programmazione dei “RT Specialistici” la ditta Charm Sciences,Inc si è resa disponibile a fornire gratuitamente ai Laboratori partecipanti un loro kit di nuova produzione. LSL essendo un organizzazione”Super Partes” ha informato dell’evento le altre ditte produttrici di kit analoghi invitandole a mettere a disposizione i loro prodotti. Ha aderito all’invito,nei tempi prestabiliti, solo la ditta DSM. Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 5

Progettazione-scelta degli Inibenti B-LATTAMICI Amoxicillin Ceftiofur SULFAMIDICI Sulfadiazine TETRACICLINE Oxytetracycline AMINOGLICOSIDI Neomycin Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 6

Progettazione del Ring Test MOLECOLE UTILIZZATE: 5 diversi Antibiotici CAMPIONI DI LATTE: 6 campioni di latte vaccino KIT : - Cow Side II Test - Charm Sciences,Inc (inviato da LSL) - Delvotest SP 5 Pack-NT – DSM (inviato da LSL) - kit in uso presso i singoli partecipanti Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 7

Progettazione-campioni Preparazione di 5 campioni con concentrazione di antibiotico prossimo al MRL Preparazione di 1 campione di controllo con una concentrazione di antibiotico circa 10 MRL Diversamente dai precedenti non è stato inserito nel set di campioni del RT un campione NEGATIVO

Preparazione dei campioni Latte scremato UHT addizionato con quantità note di antibiotico tali da raggiungere i rispettivi livelli MRL (Limite di Residuo Massimo) Amoxicillin MRL 4 ppb Ceftiofur MRL 100 ppb Sulfadiazine MRL 100 ppb Oxytetracycline MRL 100 ppb Neomycin MRL 500 ppb Campione di controllo Positivo (b-lattamico ~10 MRL) Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 9

Preparazione dei campioni Distribuzione di 5 ml di latte in provette da 10 ml Prove di omogeneità del campione (10%) Liofilizzazione Test di conformità del prodotto finito Test finale di stabilità 27/11/2009 CAMPIONE CHARM COW SIDE II TEST DELVOTEST SP5 PACK-NT SULFADIAZINA + AMOXICILLINA OXITETRACICLINA - NEOMICIN CEFTIOFUR BETA LATTAMICO Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 10

Spedizione campioni e Raccolta dati Protocollo operativo Materiali: Campioni Di Latte Liofilizzato; 1 Kit Charm Cow Side Ii Con Relative Istruzioni; 1 Kit Delvotest Sp5 Pack-nt Con Relative Istruzioni.  Modalita’ Operative:  Ricostituire Tutti I Campioni Con 4,5 G ± 0,1 G Di Acqua Deionizzata Agitando Vigorosamente Fino A Completa Dispersione Del Liofilizzato. Eseguire Le Analisi Utilizzando I Due Kit Da Noi Forniti Oltre Al Kit Normalmente Usato Nel Proprio Laboratorio. Riportare I Risultati Nella Tabella Allegata Ed Inviarli Al Laboratorio Standard Latte Tramite Fax Entro Il Giorno 26-11-2009  I Campioni Vanno Conservati A 4°c ± 2 °C Fino Al Momento Dell’uso. ESPRIMERE I RISULTATI UTILIZZANDO LA SEGUENTE LEGENDA:  + = POSITIVO      - = NEGATIVO +/- = DUBBIO, PREVALENTE POSITIVO -/+ = DUBBIO, PREVALANTE NEGATIVO Assemblaggio dei campioni e dei 2 kit e spedizione il 17 Novembre 2009 Campioni CHARM COW SIDE II DELVO TEST SP5 PACK-NT METODO IN USO 1 2 3 4 5 6 Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 11

Laboratori partecipanti PARTECIPANTI n° 70 RISULTATI AL 30 novembre 2009 n° 62 Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 12

Risultati A = CHARM B = DELVO SP5 PACK-NT C = KIT IN USO (45 LAB. - DELVOTEST ; 7 LAB. - COPAN TEST ; 5 LAB - ECLIPSE) Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 13

Risultati A - Cow Side II B - Delvotest C - Metodo in uso Amoxicillina Ceftiofur Ctrl + Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 14

Risultati A - Cow Side II B - Delvotest C - Metodo in uso Sulfadiazina Oxitetraciclina Neomicina Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 15

Considerazioni finali L’analisi approfondita dei risultati sarà effettuata dopo la completa elaborazione dei risultati e la preparazione e invio del Report. Dalla “lettura” dei moduli contenenti i risultati si si può ipotizzare che in alcuni laboratori non ci sia un uso sistematico, ad ogni sessione di lavoro, dei campioni di controllo POSITIVO e NEGATIVO. L’assenza del campione sicuramente negativo, contrariamente a quanto atteso dai laboratori, ha aumentato la percentuale di risultati errati rispetto ai precedenti RT specialistici. Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 16

GRAZIE PER LA VOSTRA ATTENZIONE Ricerca Inibenti nel latte vaccino 10° Meeting AIA-LSL 17