Tecnologia del DNA ricombinante Unità didattica per una IV liceo scientifico sperimentale Plasmidi e Coniugazione I Virus I Trasposoni La Tecnologia del DNA Ricombinante

Plasmidi e Coniugazione Nella cellula batterica possono essere presenti piccoli anelli di DNA che portano poche informazioni -geni-  i plasmidi. I plasmidi sono circolari, hanno DNA a doppio filamento e sono autoduplicanti. Ogni cellula batterica può contenere un numero variabile di plasmidi. In E. coli è stata descritta una dozzina di tipi diversi di plasmidi tra cui i più importanti sono il plasmide F della fertilità e i plasmidi R della resistenza ai farmaci.

Plasmidi e Coniugazione Il Plasmide F Primo plasmide ad essere identificato. (cellule F+) 25 geni che controllano la produzione di strutture proteiche, i Pili. La Coniugazione è il trasferimento di DNA da una cellula ad un’altra tramite contatto avvenuto grazie a queste strutture. La cellula F- in questo modo diventa F+ e acquisisce la capacità d coniugarsi.

Plasmidi e Coniugazione Il Plasmide F Di particolare interesse è il fatto che il plasmide F piò integrarsi nel cromosoma batterico portando in una cellula ricevente parte del genoma batterico della cellula F+ il quale può ricombinare col cromosoma della cellula ricevente modificando la sequenza di DNA.

Plasmidi e Coniugazione I Plasmidi R Sono plasmidi che contengono geni che conferiscono resistenza agli antibiotici. Possono passare da una cellula batterica ad un’altra, da un plasmide R ad un altro, possono integrarsi nel cromosoma batterico. Possono contenere fino a 10 geni per la resistenza ad antibiotici diversi.

I Virus Formati essenzialmente da un capside proteico che circonda una molecola di acido nucleico. Possono contenere DNA o RNA, a filamento singolo o doppio, circolare o lineare. Non è in grado di riprodursi da solo.

I Virus Possono avere un ciclo litico o lisogenico (profagi).

I Virus La trasduzione batterica. Può essere generalizzata o specializzata.

I Virus Anche le cellule eucariote possono essere infettate da virus che possonoandare incontro a ciclo litico o lisogenico (provirus). Esempio virus HIV (virus a RNA).

I Trasposoni Sono elementi genetici mobili ovvero segmenti di DNA che si spostano da una zona all’altra del cromosoma. Possiedono la trasposasi. Esistono trasposoni semplici e complessi. I trasposoni degli eucarioti sono simili a quelli dei procarioti

La Tecnologia del DNA ricombinante Scoperta della DNA-ligasi Scoperta degli enzimi di restrizione (estremità piatte o coesive) Enzima BamHI

La Tecnologia del DNA ricombinante Clonazione del DNA Librerie genomiche PCR (polymerase Chain Reaction) Primer Taq polimerasi

La Tecnologia del DNA ricombinante Sequenziamento didesossinucleotidi didesossinucleotidi fluorescenti

La Tecnologia del DNA ricombinante Ibridazione