Costanti di ionizzazione. MODALITA’ DI PREPARAZIONE DI SOLUZIONI TAMPONE.

Presentazione sul tema: "Costanti di ionizzazione. MODALITA’ DI PREPARAZIONE DI SOLUZIONI TAMPONE."— Transcript della presentazione:

1 Costanti di ionizzazione

2 MODALITA’ DI PREPARAZIONE DI SOLUZIONI TAMPONE

3 d (densità) = g /mlg =d x ml M = n moli/L soluzione n moli = g / PM g PM x L soluzione M = M x PM x L soluzioneg = d x ml PM x L soluzione M = M x PM x L soluzione d ml = x PM x L soluzione g = g PM x L soluzione x PM x L soluzione x ml g ml = g PM x L soluzione

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5 Esempio: Calcolare il pH di una soluzione tampone che contiene CH 3 COOH 0,10M e CH 3 COONa 0,20M. Il K a dell’acido acetico è 1.7x10 -5 In soluzione acquosa il sale acetato di sodio dissocia CH 3 COONa(s)  CH 3 COO - (aq) + Na + (aq) per cui la soluzione è 0.20M in CH 3 COO - (la base) Applicando l’equazione di Henderson-Hasselbach si ha: Il pK a dell’acido acetico è: 5.070.304.77log 2pH= 4.77 0.10 0.20 log4.77 COOH][CH ]COO[CH logpKpH 3 3 a   

6 Esempio: Calcolare il rapporto fra la concentrazione di acido acetico e di ione acetato necessari per preparare una soluzione tampone con pH 4,9. Il pK a dell’acido acetico è 4,77 Ad esempio se in un litro di soluzione mettiamo 1,0 moli di acido acetico, dobbiamo aggiungere 1,35 moli di acetato di sodio Applicando l’equazione di Henderson-Hasselbach si ha:

7 Per preparare 100ml di soluzione: Per ogni ml di acido acetico si devono usare 1,35 ml di acetato di sodio per un totale di 2,35 ml Volendo preparare una soluzione di 100ml: 1ml di CH 3 COOH : 2,35 ml tot =x ml di CH 3 COOH :100 100 x 1/ 2,35 = 42,6 ml di CH 3 COOH e 57,4 ml di CH 3 COO - (che è il complemento a 100) Ad esempio se in un litro di soluzione mettiamo 1,0 moli di acido acetico, dobbiamo aggiungere 1,35 moli di acetato di sodio

8 Determinazione della concentrazione proteica mediante BLU COOMASSIE Il blu coomassie è un colorante che quando si lega alle proteine cambia colore da marrone a blu La quantità di colorante che si lega è proporzionale alla quantità di proteina presente L’intensità del colore blu è proporzionale alla concentrazione di proteina

9 1 mg/ml2 mg/ml4 mg/ml8 mg/ml16 mg/ml COSTRUZIONE DI UNA RETTA DI TARATURA  Proteina a concentrazione nota (BSA)  Colorante (Bradford)

10 Camp.H 2 0 µl µl BSA µg BSA Bradford µl Abs 595 nmM  µg/ml Bianco50000 0,4230,4530,438 0000 14901015000,5980,6390,6190,181 24802025000,680,6840,6820,244 44604045000,7960,8110,8040,366 84208085001,0010,9981,0000,562 [BSA]= 0.1 mg/ml= …………µg/ml=………µg/µl

11 Abs 595 nm

12 Camp.H 2 0 µl Camp. µl Bradford µlAbs 595 nmM  µg/ml Bianco500 0,4230,4530,438 0000 1500 0,5980,6390,6190,181 2500 0,680,6840,6820,244 4500 0,7960,8110,8040,366 8500 1,0010,9981,0000,562 carico4991500…. rifiutato4991500…. eluato4982500….