LABORATORIO DI FISIOLOGIA VEGETALE

Presentazione sul tema: "LABORATORIO DI FISIOLOGIA VEGETALE"— Transcript della presentazione:

1 LABORATORIO DI FISIOLOGIA VEGETALE
METODI DI DOSAGGIO BIOLOGICO DEGLI ORMONI

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TEST BIOLOGICI Gli ormoni vegetali sono rappresentati da 6 classi di composti: AUXINE CITOCHININE GIBERELLINE ACIDO ABSCISSICO ETILENE BRASSINOSTEROIDI

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TEST BIOLOGICI Principio: Un test biologico utilizza porzioni di piante o tessuti vivi per determinare l’attività ormonale di un estratto.

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TEST BIOLOGICI Caratteristiche Un test biologico deve avere delle caratteristiche: Specificità: la risposta deve essere specifica rispetto all’ormone, cioè diversi ormoni non devono dare la stessa risposta Sensibilità: la risposta deve avvenire già a bassissime concentrazioni, nell’ordine nM Riproducibilità: ripetendo il test su materiale differente la risposta deve essere comparabile

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AUXINA L’auxina naturale è l’acido indolacetico (IAA) prodotto per deaminazione e successiva decarbossilazione e ossidazione del triptofano

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AUXINA Effetti fisiologici principali: Processi di distensione cellulare Crescita radicale Dominanza apicale

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AUXINA Test biologici: Curvatura del fusto di pisello sezionato Test di diminuzione del pH del mezzo di incubazione Crescita per allungamento del coleottile di avena o frumento

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Curvatura del fusto di pisello sezionato

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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA

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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA Il coleottile d’avena è sensibile all’incremento della concentrazione auxinica, rispondendo con un allungamento proporzionale alla concentrazione auxinica nel mezzo

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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA Metodo Per ottenere risultati statisticamente significativi bisogna usare un numero congruo di sezioni di coleottile, ossia almeno 20 per ogni concentrazione provata poi in doppio (40 sezioni per concentrazione testata).

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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA Materiali necessari: Coleottili eziolati d’avena ottenuti germinando al buio per 5 giorni i semi in Vermiculite; Capsule Petri; Soluzione di saccarosio al 3%; Soluzioni a concentrazioni note e scalari di Auxina da 10-8 a 10-4 M; Lame accoppiate a 1 cm di distanza

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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA Metodologia Porre in un Baker 200 ml della soluzione al 3% di saccarosio e 240 coleottili recisi a 1 cm; dopo 20’ in agitazione per allontanare l’auxina endogena, porre in 12 differenti capsule, contenenti soluzioni zuccherine a concentrazioni crescenti di auxina (da 0 a 10-4 M) 20 coleottili. Dopo 24 ore misurare con un righello le lunghezze.

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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA Soluzioni 10-3 e 10-5 M di auxina Soluzione al 3% di saccarosio Beker Capsule Petri con 10 ml di soluzioni crescenti di Auxina Lame accoppiate ad 1 cm di distanza

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TEST BIOLOGICO DEL COLEOTTILE D’AVENA Metodo Sul bancone è presente una soluzione al 3% di saccarosio, una soluzione 10-3 ed un’altra 10-5 M di auxina di cui vanno utilizzate le quantità indicate: * Prelevare dalla soluzione di auxina 10-5 M

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19 Risultati tipo ottenuti con 20 coleottili
Campione n. Controllo Auxina 10-8 M Auxina 10-7 M Auxina 10-6 M Auxina 10-5 M Auxina 10-4 M 1 1,1 1,15 1,3 1,41 1,43 1,45 2 1,2 1,25 1,42 1,54 1,56 1,58 3 1,4 1,46 1,65 1,79 1,82 1,85 4 1,36 1,53 1,66 1,69 1,72 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Media 1,21 1,26 1,57 1,59 Dev.st. 0,11 0,12 0,13 0,14 Differenza % 21 33 36 38

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