Matrix Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI)

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1 Matrix Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI)
Ionization Methods (Nobel, e-museum) Nobel Prize in Chemistry 2002 Electrospray Ionization John B. Fenn Matrix Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI) Koichi Tanaka

2 Classi di analizzatori di massa
A settore magnetico A doppia focalizzazione A quadrupolo (lineare) Trappola ionica a quadrupolo A tempo di volo Trasformata di fourier

3 Analizzatore di massa a quadrupolo
Massimo valore m/z ~ 4 000 Risoluzione ~ 3 000 I quadrupoli sono strumenti a bassa risoluzione Si lavora normalmente alla risoluzione di una unità di massa. Leggero, di dimensioni contenute Facile da accoppiare alla cromatografia Efficiente trasmissione degli ioni Necessaria una elevata precisione nell’allineamento delle barre degli elettrodi

4 Quadrupoles have variable ion transmission modes
mass scanning mode m1 m3 m4 m2 single mass transmission mode m2 m3 m1 m4

5 Ionization Method Typical Analytes Sample Introduction Mass Range
Method Highlights Electron Impact (EI) Relatively small. Volatile. GC or liquid or solid probe To 1000 Daltons Hard method. Provides structural info Chemical Ionization (CI) Soft method. Molecular ion peak [M+H]+ Electrospray (ESI) Peptides/proteins. Non-volatile. Liquid Chromatography To 200,000 Soft method. Ions often multiply charged. Matrix Assisted Laser Desorption (MALDI) Sample mixed in solid matrix To 500,000 Soft method. Very high mass range. Fast Atom Bombardment (FAB) Carbs/peptides. viscous matrix To 6000 Soft method, but harder than ESI or MALDI

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8 Analizzatore a tempo di volo (TOF)
Zona di accelerazione con campo elettrostatico E Ioni positivi Sorgente d V = 0 dE = V0 = V V = V0 L

9 Time-of-flight (TOF) Mass Analyzer
Source Drift region (flight tube) + + detector + + V Ions are formed in pulses. The drift region is field free. Measures the time for ions to reach the detector. Small ions reach the detector before large ones.

10 Voyager-DE STR MALDI TOF
Sample Linear Extraction plate Reflector detector grids Timed ion detector selector Reflector Laser Camera Pumping Pumping

11 Reflectron TOF Reflectron TOF a stadio singolo
Metodo per correggere la distribuzione di velocità, diminuendo Δt Sorgente Reflectron TOF a stadio singolo

12 Analizzatore di massa a tempo di volo
Massimo valore m/z > Risoluzione fino a – Il reflectron consente di: Ridurre le dimensioni Aumentare la risoluzione Ideale accoppiamento con sorgenti pulsate Efficiente trasmissione degli ioni

13 The mass spectrum shows the results
MALDI TOF spectrum of IgG MH+ 10000 20000 30000 40000 Relative Abundance (M+2H)2+ (M+3H)3+ 50000 100000 150000 200000 Mass (m/z)

14 ESI Spectrum of Trypsinogen (MW 23983)
M + 15 H+ 1599.8 M + 16 H+ M + 14 H+ 1499.9 1714.1 M + 13 H+ 1845.9 1411.9 1999.6 2181.6 m/z Mass-to-charge ratio

15 Rivelatori di ioni Lastre fotografiche Coppa di Faraday
Ad AgBr. Sono state i primi rivelatori di ioni Coppa di Faraday Un semplice elettrodo collettore schermato Economico, poco sensibile Rivelatori a scintillazione A cristalli di materiale fosforescente Moltiplicatori di elettroni A dinodi separati A dinodo continuo

16 Moltiplicatori di elettroni
Moltiplicatore a dinodi separati Fascio di ioni All’amplificatore Fenditura Elettroni – Cascata di elettroni + + – – + Superficie conduttrice a resistenza variabile 2kV Collegamento a terra attraverso l’amplificatore Moltiplicatore a dinodo continuo

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