Microfertilizzazione assistita

Presentazione sul tema: "Microfertilizzazione assistita"— Transcript della presentazione:

1 Microfertilizzazione assistita
Scuola di Specializzazione in Fisiopatologia della Riproduzione degli Animali Domestici Microfertilizzazione assistita Corso di Biotecnologie della Riproduzione Animale Prof.ssa M.E. Dell’Aquila Micromanipolatore ICSI AA 2016/17

2 Sommario (1) Introduzione Notizie storiche
Tecniche di perforazione della Zona Pellucida Tecniche di introduzione artificiale del seme nell’ovocita

3 Sommario (2) Preparazione dell’ovocita e del seme per l’ICSI
Procedura di ICSI ICSI in medicina riproduttiva umana ICSI in specie di interesse zootecnico ICSI per la ricerca sul processo fecondativo

4 Notizie storiche Keefer & Brackett, 1987 Palermo et al., 1992
Van Steirteghem et al., 1993

5 Stazione di micromanipolazione

6 Tecniche di perforazione della Zona Pellucida
ZD= zona drilling ZT= zona thinning PZD= partial zona dissection PZR= partial zona removal

7 Tecniche di introduzione artificiale del seme nell’ovocita
SUZI= subzonal sperm injection ICSI= intracytoplasmic sperm injection

8 SCHEMA

9 Preparazione degli ovociti e degli spematozoi per l’ICSI
Preparazione ovociti - rimozione cellule cumulo ooforo (80 UI/ml ialuronidasi in IVM medium) - selezione morfologica (PB, ZP, spazio perivitellino, citoplasma) Preparazione spermatozoi - lavaggi (Tyr-HEPES; EBSS) - riduzione della motilità (+10% PVP)

10 Allestimento della piastra di ICSI
Microgoccia di HTF con ovocita Microgoccia di EBSS 10% PVP con seme Striscia di seme per la messa a fuoco del fondo della piastra Piastra petri 60 mm Ø

11 Procedura di ICSI Immobilizzazione ed aspirazione dello spermatozoo
Orientazione dell’ovocita Avvicinamento dello spermatozoo all’estremità della pipetta di iniezione Perforazione delle membrane ovocitarie Aspirazione di parte del citoplasma della cellula uovo nella pipetta di iniezione Rilascio dello spermatozoo nel citoplasma Rilascio dell’ovocita-passaggio nel mezzo di coltura

12

13 Problemi Eccessiva suzione di citoplasma Eccessivo rilascio di medium
Difficoltosa perforazione membrane ovocita Difficoltoso rilascio dello spermatozoo Alterazioni nel rilascio del calcio intracellulare

14 ICSI in medicina riproduttiva umana
ICSI con: Very Few Sperm Cells Sperm Head Immotile Sperm Dead Sperm Grossly Defective Sperm Cells Round/Elongated Spermatids

15 ICSI in specie di interesse zootecnico
Usata nelle specie nelle quali la fertilizzazione in vitro con tecnica convenzionale non consegue risultati buoni e riproducibili Si può effettuare con spermatozoi presessati

16 ICSI per la ricerca sul processo fecondativo
Sistema di utilità unica per indagini sulla sequenza di eventi di interazione tra ovocita e spermatozoo Microscopia CLSM

17 Letture consigliate Transgenic Animal Technology (cap 20)
Dell’Aquila et al., Hum Reprod 1997