Analisi di espressione

Presentazione sul tema: "Analisi di espressione"— Transcript della presentazione:

1 Analisi di espressione
(mRNA) Northern Estensione del primer (primer extension) Protezione dalla S1/RNasi (mapping) RT-PCR (qRT-PCR o RT-qPCR) microarray

2 Analisi di espressione
(proteine) Western Immunoprecipitazione Immunomicroscopia

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4 Analisi di espressione
(mRNA)

5 Indicazione di controllo traduzionale
northern western A B A B mRNA X X actina mRNA actina

6 Estensione del primer (primer extension)
mRNA totale Estensione del primer (primer extension) cap mRNA globina 3’ 5’ oligo antisenso marcato ibridazione estensione con RT Analisi dei frammenti estesi su gel di sequenza frammento protetto

7 Protezione da RNasi (RNase Protection)
mRNA totale Protezione da RNasi (RNase Protection) cap mRNA globina 3’ 5’ sonda RNA antisenso ibridazione trattamento con RNasi Analisi dei frammenti protetti su gel di sequenza frammento protetto

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9

10 PCR da mRNA (RT-PCR)

11 qRT-PCR (quantitative PCR)

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13 Tecniche di analisi di interazione
DNA(RNA)-Proteine Foot-printing EMSA (electrophoretic mobility shift assay) Chromatin immunoprecipitation (CHIP)

14 Analisi interazioni DNA-proteine: saggio di footprinting

15 Analisi interazioni DNA-proteine: saggio EMSA

16

17 Chromatin immunoprecipitation (Chip)

18 Sistemi (sperimentali) di espressione
In vitro: - estratti cellulari In vivo: - cellule procariotiche cellule eucariotiche in coltura - animali transgenici

19 Vettori di espressione

20 Vettore di espressione in cellule di mammifero

21 Proteine di fusione prom Tag o rep. cDNA term trascrizione traduzione

22 Trasformazione del lievito (Saccharomyces cerevisiae)
diversi tipi di vettori vettori “navetta” batteri-lievito possibilità di ricombinazione omologa

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24 Trasfezione di cellule in coltura
transiente stabile vettori episomali vettori virali

25 Trasfezione in cellule in coltura

26 Vettori episomali

27 Metodi di trasfezione fosfato di calcio elettroporazione liposomi
virus (SV40, retrovirus)

28 Topi transgenici

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