Tesi in Microbiologia Dipartimento di Farmacia e Biotecnologie (FaBiT)

Presentazione sul tema: "Tesi in Microbiologia Dipartimento di Farmacia e Biotecnologie (FaBiT)"— Transcript della presentazione:

1 Tesi in Microbiologia Dipartimento di Farmacia e Biotecnologie (FaBiT)
Prof. Giorgio Gallinella Prof.ssa Giovanna Gentilomi Dott.ssa Elisabetta Manaresi (ricercatore) Dott.ssa Francesca Bonvicini (ricercatore) Dott.ssa Gloria Bua (assegnista) Dott.ssa Ilaria Conti (dottoranda) Microbiologia (padiglione 11, 3° piano) Policlinico universitario S. Orsola Microbiologia

2 PARVOVIRUS B19 Tassonomia: Famiglia = Parvoviridae
Sottofamiglia = Parvovirinae Genere = Erythrovirus Specie = B19 (Genotipi 1-3) Capside icosaedrico di 22 nm di diametro ssDNA di 5596 nucleotidi a polarità +/- NS VP1u VP2 Microbiologia

3 PARVOVIRUS B19 Trasmissione per via respiratoria
Target principale: Cellule progenitrici eritroidi del midollo osseo Patogenesi: Eritema infettivo o V malattia Sindromi poliatropatiche Crisi aplastiche transitorie Ipoplasia eritrocitaria Idrope e/o morte fetale Strategie terapeutiche: Terapia antivirale Vaccini Anti-infiammatori Trasfusioni di sangue Immunoglobuline (IVIG) Microbiologia

4 TECNICHE UTILIZZATE Colture cellulari (coltura primaria di cellule progenitrici eritroidi EPCs, linea cellulare UT7/EpoS1) Tecniche di biologia molecolare: clonaggio in vettori plasmidici, trasformazione di batteri competenti e purificazione di DNA plasmidico; trasfezione di cellule eucariotiche; saggi di vitalità cellulare; saggi di immunofluorescenza su vetrino (IIF); saggi di ibridazione molecolare in situ (FISH); analisi al citofluorimetro per la ricerca di antigeni virali e cellulari; purificazione di acidi nucleici; Southern-Blot; PCR (PCR end point, PCR real time, RT-PCR real time). Microbiologia

5 LINEE DI RICERCA Ricerca di potenziali molecole con attività antivirale (antivirali ad ampio spettro, retargeted drug, molecole di nuova sintesi) Studio dell’interazione virus-cellula Sistema sintetico per la produzione di virus ricombinante e proteine Microbiologia

6 EPCs e cellule UT7/EpoS1 infettate con B19V + composto da testare
1.Ricerca di molecole con potenziale attività antivirale Saggi di vitalità cellulare BrdU incorporation based assay WST-8 based assay Analisi della replicazione virale EPCs e cellule UT7/EpoS1 infettate con B19V + composto da testare Real Time PCR per la quantificazione degli acidi nucleici virali Analisi della produzione di proteine virali IIF per le proteine capsidiche Effetti dell’idrossiurea su B19V ed EPCs Microbiologia

7 2.Studio dell’interazione virus-cellula
Valutazione della replicazione del B19V ed espressione degli antigeni virali: Real Time PCR, FISH per la ricerca degli acidi nucleici virali Immunofluorescenza indiretta, citofluorimetria per l’analisi dell’espressione di proteine virali Citofluorimetria per l’analisi delle proteine e del DNA cellulari EPCs o linea di UT7/EpoS1 infettate con B19V Microbiologia

8 3.Sistema sintetico per la produzione di virus ricombinante e proteine
1. Bioinformatic analysis 2. Molecular cloning 3. Transfection of UT7/EpoS1 cells 4. Infection of EPCs (two consecutive rounds) Valutazione della replicazione del B19V ed espressione degli antigeni virali: Real Time PCR, FISH per la ricerca degli acidi nucleici virali Immunofluorescenza indiretta per l’analisi dell’espressione di proteine virali FISH per il DNA virale Microbiologia

9 Informazioni generali
Posti disponibili per CTF 1 studente all’anno Durata della tesi Minimo 6 mesi (massimo 9 mesi) Periodo di svolgimento del tirocinio Avere terminato il tirocinio in farmacia Essere a buon punto con gli esami Consiglio sui corsi a scelta da frequentare Nessuna richiesta particolare Microbiologia