Primers fluoriscinati

Presentazione sul tema: "Primers fluoriscinati"— Transcript della presentazione:

1 Primers fluoriscinati
6-FAM: blu NED: giallo VIC: verde PET: rosso I primer sono marcati con 4 fluorocromi diversi che emettono fluorescenza ad una determinata lunghezza d’onda quando sono eccitati da un raggio laser

2 I Cinque Colori..... Quattro colori identificano i diversi marcatori
Il quinto colore (arancione) identifica il ladder interno

3 A sample print -out for one person, showing all loci tested.
Different colours help with interpretation

4 Esempio di tipizzazione

5 Ladder allelico

6 Medicina Legale

7 Medicina legale

8 Sequenziamento del DNA
Metodo più accurato per ottenere informazioni precise e definitive sulla sequenza precisa di un tratto di DNA Metodo ideale per la rilevazione di mutazioni o polimorfismi (SNP) difficilmente evidenziabili e di mutazioni puntiformi DNA mitocondriale

9 Metodo di Sanger Il DNA da sequenziare è ottenuto come singolo filamento Si utilizzano dideossinucleotidi che sono privi dei gruppi ossidrilici in C-2 e C-3 ( nucleotidi terminatori) I dideossinucleotidi ( o i primers) sono marcati con isotopi radioattivi o con 4 diversi fluorocromi che marcano le 4 basi azotate del DNA Alla fine della reazione si ottiene miscela di reazioni parziali, terminate in qualunque posizione della catena nascente Si effettua un’elettroforesi capillare dei frammenti: la corsa dipenderà dalla loro dimensione

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11 ACTGTCCTGAAT A* AC* ACT* ACTG* ACTGT* ACTGTC* ACTGTCC* ACTGTCCT*

12 Sequenza di DNA: omozigote normale

13 Sequenza di DNA: mutazione eterozigote