Presentazione sul tema: ""— Transcript della presentazione:

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29 Carbossipeptidasi

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34 E + S ES E + P Equilibrium: All’inizio: E + S ES E + P E + S ES E + P k1 k-1 k2 formazione del prodotto: velocità V0 = k2[ES] formazione del complesso ES: velocità V1 = k1[E][S] scissione del complesso ES: velocità V V0 = k-1[ES] + k2[ES] Allo stato stazionario [ES] è stabile: formazione del complesso ES = scissione del complesso ES k1[E][S] = k-1[ES] + k2[ES] [E][S] k-1 + k2 [ES] k1 KM: costante di Michaelis-Menten [E][S] = KM[ES] = = KM

35 [E][S] = KM[ES] Problema: non conosciamo KM, [E] e [ES]
Sappiamo che [Etotale] = [E] + [ES] cioè [E] = [Etotale] – [ES], perciò ([Etotale] – [ES])[S] = KM[ES] [Etotale][S] = KM[ES] + [ES][S] = (KM + [S])[ES] [Etotale][S] (KM + [S]) = [ES] Formazione del prodotto: velocità V0 = k2[ES] k2 [Etotale][S] (KM + [S]) V0 = La massima velocità si raggiunge quando tutti i siti catalitici sono saturati con il substrato, cioè quando [Etotale] = [ES] Massima velocità: Vmax = k2[Etotale]

36 L’equazione di Michaelis-Menten:
Quando [S] >> KM, V0 = Vmax Quando [S] = KM, V0 = Vmax/2

37 Grafico di Michaelis-Menten (Cinetica di Michaelis-Menten)
KM = costante di Michaelis-Menten

38 1 KM 1 1 V0 Vmax [S] Vmax x = ay + b Equazione di Lineweaver & Burk: =

39 Grafico di Lineweaver-Burk (grafico dei doppi reciproci)

40 KM: (spesso) una misura dell’affinità per il substrato.
(1100) 0.66 Campbell 5.0 Stryer Anidrasi carbonica CO Campbell 8 Berg Stryer

41 kcat: il numero di turnover di un enzima
il numero di molecole di substrato che vengono convertite in prodotto da una molecola di enzime nell’unità di tempo (normalmente 1 secondo) quando l’enzima è completamente saturato dal substrato. kcat = Vmax/[Etotale] Normalmente kcat corrisponde alla costante di velocità della tappa limitante del ciclo catalitico.

42 Voet 10,000,000 Str 25000 Str,

43 Chimotripsina

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45 Reazioni con più substrati

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