Università degli Studi di Napoli Federico II FACOLTÀ DI SCIENZE MATEMATICHE, FISICHE E NATURALI DOTTORATO DI RICERCA IN SCIENZE CHIMICHE Sintesi e purificazione.

Presentazione sul tema: "Università degli Studi di Napoli Federico II FACOLTÀ DI SCIENZE MATEMATICHE, FISICHE E NATURALI DOTTORATO DI RICERCA IN SCIENZE CHIMICHE Sintesi e purificazione."— Transcript della presentazione:

1 Università degli Studi di Napoli Federico II FACOLTÀ DI SCIENZE MATEMATICHE, FISICHE E NATURALI DOTTORATO DI RICERCA IN SCIENZE CHIMICHE Sintesi e purificazione di un inibitore della trombina Candidata : Valeria Turco

2 Coagulazione del sangue

3 Inibitore della trombina Sito catalitico Trombina CSES Exo sito Ile-Thr-Tyr-Thr-Asp-----------------------Pro-Glu-Ser-His-Asn-Asx-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln Hirudina Chg-Arg-Nal-Thr-Asp- D Ala-ßAla-ßAla-Pro-Glu-Ser-His-Phe-Gly-Gly-Asp-Tyr-Glu-Glu-Ile-Pro-Aib-Aib-Tyr-Cha- D Glu Hirunorm IV 40 aa

4 Sito catalitico Trombina CSES Exo sito peptide porfirina TAMPP H-Chg-Arg-2Nal-OH CS3 HO-Succ-Pro-Glu-Tyr-Asp-Pro-Chg-OH ES7 Inibitore della trombina

5 CS ES N NH NH N NH-Succ-Pro-Glu-Tyr-Asp-Pro-Chg-OH NH 2 H 2 N H-Chg-Arg-2Nal-NH CS3-TAMPP-ES7

6 Fasi sperimentali Sintesi dell’inibitore Purificazione Inserzione del metallo

7 Primo peptide + peptide CS3 TAMPP CS3-TAMPP CS3-TAMPP-CS3 TAMPP CS3-TAMPP

8 Secondo peptide + peptide ES7 CS3-TAMPP CS3-TAMPP-ES7 CS3-TAMPP CS3-TAMPP-ES7 peptide ES7

9 Inserzione metallo Applicazione in diagnostica: rivelazione dei trombi MnAc 2

10 Inserzione metallo N NH NH N NH-Succ-Pro-Glu-Tyr-Asp-Pro-Chg-OH NH- 2Nal-Arg-Chg-H 2 H 2 N NH MnAc 2 N N N N NH-Succ-Pro-Glu-Tyr-Asp-Pro-Chg-OH NH- 2Nal-Arg-Chg-H 2 H 2 N NH Mn III mAU nm 200400600800 22,13 min mAU 400 200 0 22.13 min 22,86 min mAU

11 Purificazione Mn III -CS3-TAMPP-ES7 HPLC: Minutes 1015202530 mAU 0 200 400 0 200 400 1: 210 nm, 8 nm 100 Mn-trans pulito 25-11-06 210 nm 22.13 min Spettro di massa: 1332.01665.21998.42331.62664.82998.0 Mass (m/z) 0 7520.9 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % Intensity 1862.80 2182.97 2088.11 1977.23 2205.44 2049.96 2117.3 (M)

12 Conclusioni E’ stato sintetizzato e purificato un nuovo inibitore della trombina, costituito da una porfirina che porta due peptidi diversi. E’ stato inserito uno ione metallico all’interno dell’anello porfirinico. Il complesso metallo-inibitore potrebbe trovare un’applicazione nel campo della diagnostica.

13 Interazione con la trombina legata ai coaguli Formazione dei coaguli La molecola sintetizzata lega in vitro coaguli di fibrina e ne inibisce la crescita Coagulo di fibrina + inibitore