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Lab. Chimica Analitica II _HPLC. Lab. Chimica Analitica II _HPLC Cromatogramma di eluizione LSC.

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Presentazione sul tema: "Lab. Chimica Analitica II _HPLC. Lab. Chimica Analitica II _HPLC Cromatogramma di eluizione LSC."— Transcript della presentazione:

1 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

2 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Cromatogramma di eluizione LSC

3 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

4 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Reazioni di silanizzazione per la produzione di fasi legate Possibili gruppi funzionali sulla superficie della silice

5 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Effetto della lunghezza di catena sulle prestazioni di una colonna di silossano in fase inversa riempita con particelle di 5 m. MeOH: H 2 O = 50%, 1ml/min

6 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

7 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Forza del solvente (su silice) di alcune miscele di solventi.

8 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Forza del solvente ( 0 ) come funzione della composizione. Il solvente A è eptano Confronto dei cromato- grammi dellacrilamide ottenuti con quattro fasi mobili, ognuna con polarità 0.53

9 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Effetti della variazione della composizione sul fattore di capacità k (a,b) e sul fattore di selettività (c,d,e). Composti: 1) prednisone, 2) cortisone, 3) idrocortisone, 4) dexametasone, 5) corticosterone, 6) cortoexolone Effetti della variazione della composizione della miscela eluente Eluente: MeOH : H 2 O (H 3 PO 4 0.5 %) 1 ml/min

10 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Effetti della variazione del pH su di una separazione in fase inversa Colonna C18 5 m, 150 x 4.6 mm Eluente: KH 2 PO 4 20 mM: CH 3 CN = 95 : 5 1 ml/min, 40°C, UV 270 nm 1)Acido solfanilico 2)Solfamerazina 3)Solfisossazolo 4)Solfopiridina

11 Lab. Chimica Analitica II _HPLC a) Additivi per bibite analcoliche Colonna 250 x 4.6mm, 1 ml/min, AcOH : H 2 O = 6 : 94 b) Insetticidi organofosforati Colonna C 8 250 x 4.5 mm, 5 m, 2 ml/min, gradiente MeOH : H 2 O da 67 : 33 a 80 : 20 Tipiche applicazioni della cromatografia in fase legata

12 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

13 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Cromatogramma di 30 amminoacidi derivatizzati con o-ftalaldeide. Colonna RP-C 18, 5 m Solvente A: MeOH : THF : H 2 O (Na 2 HPO 4 0.05 M, pH 7.4) = 96 : 2 : 2 Solvente B: MeOH : H 2 O = 65 : 35

14 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Cu(II) Mix enantiomeri Scambiatore di legame (D) – penicillamina, accettore di elettroni per la separazione di: - aminoacidi e derivati - idrossiacidi, alcoli amminici

15 Lab. Chimica Analitica II _HPLC

16 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Proprietà degli eluenti, modificabili per ottenere leluizione a gradiente: Forza ionica pH Capacità di formare ponti idrogeno Forza della serie eluotropica Costante dielettrica Concentrazione dei reagenti in competizione sui siti della fase stazionaria Differenze di separazione in funzione del tipo di gradiente applicato: a) gradiente lineare, b) a gradini

17 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Variazioni nella separazione indotte dal cambiamento della pendenza del gradiente, ottenuta variando la forza ionica del NaCl Colonna: DEAE-Sephadex A-50 Eluente: TRIS-HCl 0.1 M, pH 8.3 / NaCl 8 ml/cm2h

18 Lab. Chimica Analitica II _HPLC Variazioni nella separazione indotte dal cambiamento del gradiente da lineare a non lineare Colonna: DEAE-Sephadex A-50 Eluente: TRIS-HCl 0.1 M, pH 8.3 / NaCl 8 ml/cm2h

19 uracile teofillina caffeina Ac. benzoico triptofano metilparaben butirofenone propilparaben etilPABA propiofenone esanofenone eptanofenone ottanofenone Lab. Chimica Analitica II _HPLC Effetto della temperatura in HPLC


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