Cromatografia.

Presentazione sul tema: "Cromatografia."— Transcript della presentazione:

1 Cromatografia

2 Tecniche cromatografiche
Basate sulla ripartizione Basate sull’adsorbimento

3 Metodi di ripartizione
[S]A = 0.09 [S]B = 0.91 [S]A = 1

4 EQUILIBRIO FASE MOBILE A FASE STAZIONARIA A

5 EQUILIBRIO FASE MOBILE A FASE STAZIONARIA A

6 EQUILIBRIO FASE MOBILE S S FASE STAZIONARIA S S

7 50 50 25 12.5 37.5 6 38 25 100

8 100 10 1 90 18 2.7 81 24 5 73 29 66

9 100 90 81 73 66 10 18 24 29 1 3 5

10 100

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13 Cromatografia su colonna

14 Rapporto di ripartizione
Volume di ritenzione Rapporto di ripartizione β

15 Per una specie non ritenuta: VR = VM e k’ = 1

16 Risoluzione A metà altezza: wh = w

17 Risoluzione

18 Piatti teorici e larghezza dei picchi, capacità di picchi

19 Cromatografia su carta

20 Tipi di matrici utilizzate
Agarosio Polisaccaride derivante da particolari alghe rosse cosituito da residui alternati di D-galattoso e 3,6-anidro-L-galattoso. Disponibile commercialmente come Sepharose, Sepharose CL (cross-linking con 2,3-dibromopropanolo), Superose, Bio-Gel A. Limiti di esclusione kD. Cellulosa Polimero di unità glucosidiche unite da legami -1,4. Tramite epicloridrina vengono ottenuti i legami crociati essenziali per l’utilizzo come matrice in cromatografia, il numero dei quali determina la dimensione dei pori. Destrano Polimero di residui di glucosio uniti da legami -1,6 prodotto dal batterio Leuconostoc mesenteroides. In commercio con il nome di Sephadex. La porosità dei gel a base di destrano è controllata dalla massa molecolare del destrano usato e dall’ introduzione di legami crociati ottenuti con epicloridrina. Limiti di esclusione kD Il Sephacryl è destrano con legami crociati ottenuti con N,N’-metilene bisacrilamide. Limiti di esclusione kD. Il Superdex e’ un gel composito costituito da destrano covalentemente legato ad agarosio.

21 Formazione della matrice

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23 Tipi di matrici utilizzate
Poliacrilamide: Polimero di acrilamide e N,N’-metilenbisacrilamide (quest’ultimo determina la formazione di legami crociati). E’ disponibile in commercio come Bio-GelP, con limiti di esclusione tra 0.2 e 400 kD. Polistirene Polimero di stirene legato con divinilbenzene. Silice Polimero prodotto a partire dall’ acido ortosilicico. I molti gruppi silanolo (Si-OH) rendono la matrice altamente idrofilica. Il loro eccesso può essere eliminato derivatizzando con triclorometilsilano.

24 Colonne