Attivazione e deplezione selettiva di linfociti antigene-specifici

Presentazione sul tema: "Attivazione e deplezione selettiva di linfociti antigene-specifici"— Transcript della presentazione:

1 Attivazione e deplezione selettiva di linfociti antigene-specifici
Dottorato di Ricerca in MEDICINA MATERNO INFANTILE, PEDIATRIA DELLO SVILUPPO E DELL’EDUCAZIONE, PERINATOLOGIA direttore: prof . A. Ventura Attivazione e deplezione selettiva di linfociti antigene-specifici Tutore Dr. Marco Rabusin Dottoranda Elisa Piscianz XXIV Ciclo

2 Trapianto di cellule staminali emopoietiche (HSCT)
Ag virali altri Ag cellule staminali cellule del donatore GvT cellule tumorali cellule infettate GvI GvHD cellule del ricevente trapianto attecchimento cellule target ricevente

3 Obiettivi dello studio
Mettere a punto un metodo per identificare e depletare i linfociti T allo-reattivi Identificare le condizioni migliori per: attivazione delle cellule Ag-specifiche inibizione o killing delle cellule attivate entro ore risparmiare le cellule resting

4 Mixed Leukocyte Reaction (MLR)
linfociti responder cellule stimolatrici cellule allo-geniche da donatore dal ricevente farmaci LCL-EBV cellule dendritiche allo-deplezione specifica Analisi: vitalità: 7AAD proliferazione: 3H-Thy, CFSE

5 Farmaci Folate methabolism inhibition Methotrexate (Genestier L, J Clinical Investigation, 1998) JAK pathway inhibition Tasocitinib (Manshouri T, Cancer Science, 2008) Membrane electron transport inhibition Phenoxodiol (Herst PM, Haematologica, 2009) GSH depletion 3-HAA (Lee SM, Immunology Letters, 2010) Proteasome inhibition Bortezomib (Blanco B, Blood, 2006)

6 Screening dei farmaci killing cellule attivate tossicità
cellule resting 3-HAA metabolita Trp (IDO enzyme) deplezione GSH associazione con MnCl2 (Hiramatsu R, J Cellular Biochemistry, 2008) Bortezomib inibitore del proteosoma compromette via IFk – NF-kB

7 3-HAA e MnCl2 stimolazione con LCL-EBV deplezione con 3-HAA/MnCl2
60 ore vitalità: 7AAD proliferazione: 3H-Thy Piscianz et al, Int. Immunopharmacol. 2011

8 3-HAA, MnCl2, Bortezomib stimolazione con LCL-EBV
deplezione con 3-HAA/MnCl2/Bortezomib 60 ore vitalità: 7AAD proliferazione: 3H-Thy Piscianz et al, Int. Immunopharmacol. 2011

9 Stimolazione con DCs e deplezione con farmaci
non stimolato non stimolato + 3-HAA/MnCl2 PHA PHA + 3-HAA/MnCl2 MLR MLR + 3-HAA/MnCl2

10 Test di re-stimolazione
stimolazione con DCs deplezione con 3-HAA/MnCl2 60 ore re-stimolazione (DCs 1st e DC 3rd) 60 ore vitalità : 7AAD proliferazione: CFSE

11 Conclusioni e prossimo futuro…
metodo attuabile somministrazione/associazione dei farmaci modulabile emivita dei farmaci dopo deplezione risposta a patogeni Treg