XXI CICLO DEL DOTTORATO IN MEDICINA MATERNO-INFANTILE, PEDIATRIA DELLO SVILUPPO E DELLEDUCAZIONE, PERINATOLOGIA Dottoranda: Erica Valencic Trieste, 29.

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1 XXI CICLO DEL DOTTORATO IN MEDICINA MATERNO-INFANTILE, PEDIATRIA DELLO SVILUPPO E DELLEDUCAZIONE, PERINATOLOGIA Dottoranda: Erica Valencic Trieste, 29 settembre 2006

2 PROGETTO PER LA REALIZZAZIONE DEI NUOVI LABORATORI Realizzazione di una camera bianca: locale a pressione interna positiva, a contaminazione controllata. Guide to Good Manufacturing Practice (GMP) EN/ISO 14644 Classificazione delle stanze in base alle caratteristiche dellambiente. At restIn operation 0,5 µm A3500 B 350000 C 3500000 D Not defined Concentrazioni massime di particolato espresse come numero massimo di particelle /m 3 ammesso di diametro uguale o superiore a (vedi tabella) At rest: condizione in cui gli strumenti sono in funzione ma in assenza di personale. In operation: in presenza di personale. Le classi A e B corrispondono alla classe 5 della ISO 14644, la classe C corrisponde alla ISO 7, la classe D corrisponde alla ISO 8.

3 BETAMETASONE O METILPREDNISOLONE? Perché un paziente affetto da una rara malattia del sistema immune (IPEX) risponde al betametasone e non al metilprednisolone, somministrati a dosaggi equipotenti? I farmaci vengono eliminati dalla cellula attraverso dei canali (diversi tipi), presenti sulla membrana cellulare chiamati pompe; il metilprednisolone ha maggior affinità per queste molecole rispetto al betametasone. IPOTESI: espressione elevata di questi canali = estrusione immediata dalla cellula del metilprednisolone. RODAMINA: sostanza che entra nella cellula per diffusione e viene estrusa grazie a queste pompe; è fluorescente ed è quindi possibile misurare la quantità presente nella cellula ad esempio con uno strumento, il citofluorimetro capace di leggere la fluorescenza di una molecola.

4 TEST DI EFFLUSSO DELLA RODAMINA: Incubazione delle cellule con la rodamina Si misura a tempi diversi la quantità di rodamina presente nella cellula: cellule con livelli di espressione elevati delle pompe estruderanno più rodamina e quindi in queste cellule la fluorescenza sarà minore. Inibizione, usando diversi farmaci specifici, di un canale piuttosto che un altro per individuare esattamente quale sia la proteina coinvolta in questo meccanismo.