Analisi dell’espressione di beta-sinucleina in Anolis carolinensis mediante metodiche di Western blot Candidata: Chiara Adamo Relatore: Prof. Mattia Toni.

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1 Analisi dell’espressione di beta-sinucleina in Anolis carolinensis mediante metodiche di Western blot Candidata: Chiara Adamo Relatore: Prof. Mattia Toni

2 Le Sinucleine 26/11/2015Analisi dell’espressione di beta-sinucleina in Anolis carolinensis mediante metodiche di Western blot Pagina 2 Scoperte nel 1988 da Marateaux in T. californica (Maroteaux et al., 1988) α-sin γ-sin β-sin SINUCLEINOPATIE:  Morbo di Parkinson  Demenza da corpi di Lewy  Atrofia multisistemica (Fujioka et al., 2013)

3 26/11/2015Analisi dell’espressione di beta-sinucleina in Anolis carolinensis mediante metodiche di Western blot Pagina 3 Variabilità del numero di isoforme delle sinucleine nei pesci Lampreda (Petromyzon marinus) γ-sin (DY) γ-sin (FD) “sin lampreda 3” Zebrafish (Danio rerio) Manca α-sin una β-sin due per la gamma: γ1- e γ2-sin Pesce palla (Takifugu rubripes) una α-sin una β-sin due per la gamma: γ1- e γ2- sin.

4 26/11/2015Analisi dell’espressione di beta-sinucleina in Anolis carolinensis mediante metodiche di Western blot Pagina 4 (Toni and Cioni, 2015) “Fish Sinucleins: An Update”

5 26/11/2015Analisi dell’espressione di beta-sinucleina in Anolis carolinensis mediante metodiche di Western blot Pagina 5 Anolis carolinensis scelto come modello disponibilità di un genoma sequenziato alto grado di identità con le sinucleine umane facile reperibilità dimensioni contenute resistenza in cattività Omologia: 86% Omologia: 89% Omologia: 68% per X1 e 69% per X2

6 26/11/2015Analisi dell’espressione di beta-sinucleina in Anolis carolinensis mediante metodiche di Western blot Pagina 6 Anticorpo Primario: Anticorpo monoclonale commerciale “anti-β-sin” sviluppato in topo contro l’epitopo di ratto 107-118 aa

7 Analisi dell’espressione di β-sin in A. carolinensis tramite Western blot L’anticorpo anti β-sin riconosce una banda con il peso molecolare di 15-16 kDa nei campioni di cervello, midollo spinale e occhio Il peso molecolare apparente della β-sin di lucertola corrisponde a quello della banda relativa al cervello di ratto Buona espressione di β-sin nel SNC di Anolis carolinensis l’espressione della β-sin è rilevata in tutte le regioni encefaliche Possibile ruolo fisiologico di β-sin associato in particolare all’area del SNC 26/11/2015Analisi dell’espressione di beta-sinucleina in Anolis carolinensis mediante metodiche di Western blot Pagina 7 C: cervello; MS: midollo spinale; O: occhi; M: muscoli; I: intestino; F: fegato; P: polmone; Pe: pelle R: cervello di ratto (controllo positivo) T: telencefalo; TO: tetto ottico; Di: diencefalo; Ce: cervelletto; TE: tronco encefalico; MS: midollo spinale. R: cervello di ratto (controllo positivo)

8  L’anticorpo commerciale scelto, “anti-β-sin”, riconosce in modo specifico la β-sin di Anolis carolinensis.  La β-sin risulta conservata nei rettili ed espressa a livello del SNC, suggerendo un ruolo importante di questa proteina nei neuroni o nelle cellule della glia nei rettili e un possibile coinvolgimento nella regolazione delle trasmissioni sinaptiche anche nei vertebrati non mammiferi.  I risultati ottenuti possono rappresentare una base per futuri studi di immunoistochimica sui pattern temporali e spaziali dell’espressione delle sinucleine nei rettili con l’obiettivo di identificare nuovi modelli animali per lo studio delle sinucleinopatie. 26/11/2015Analisi dell’espressione di beta-sinucleina in Anolis carolinensis mediante metodiche di Western blot Pagina 8

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