Cromatografia su strato sottile

Presentazione sul tema: "Cromatografia su strato sottile"— Transcript della presentazione:

1 Cromatografia su strato sottile
Progetto “Lauree Scientifiche” Cromatografia su strato sottile

2 “Lauree Scientifiche”
Progetto “Lauree Scientifiche” CROMATOGRAFIA La cromatografia è una tecnica analitica per separare specifiche sostanze in una miscela E’ una tecnica efficace per separare componenti di miscele complesse. Le separazioni si basano su interazioni fisico-chimiche a livello molecolare tra il supporto cromatografico, le sostanze da separare e taluni componenti del solvente mobile. Le separazioni avvengono in una colonna (colonna cromatografica) o su una lastra (TLC)

3 IMPIEGHI DELLA CROMATOGRAFIA
Progetto “Lauree Scientifiche” IMPIEGHI DELLA CROMATOGRAFIA Le applicazioni della cromatografia interessano un vasto campo della chimica, dall’inorganica all’organica, sia di sintesi che naturale. In particolare la cromatografia è una tecnica indispensabile nella chimica di sintesi e delle sostanze organiche naturali, per isolare e purificare i componenti di miscele di varia natura, e in campo biologico per purificare polisaccaridi, proteine, acidi nucleici, virus e anche cellule.

4 CROMATOGRAFIA SU STRATO SOTTILE (TLC)
Progetto “Lauree Scientifiche” CROMATOGRAFIA SU STRATO SOTTILE (TLC) La cromatografia su strato sottile o TLC, è una tecnica cromatografica di semplice preparazione; questo la rende particolarmente adatta per l'esecuzione di valutazioni qualitative o semi-quantitative. Come tutte le cromatografie, si basa sulla diversa separazione di diverse sostanze tra una fase stazionaria ed una fase mobile, in funzione dell'affinità di ogni sostanza con esse.

5 PRINCIPIO DI FUNZIONAMENTO
Progetto “Lauree Scientifiche” PRINCIPIO DI FUNZIONAMENTO Tutti i componenti della miscela sono depositati sulla lastra (fase stazionaria) e sono trasportati (eluiti) da un solvente (fase mobile) che si muove. Nella TLC l’eluente si muove dal basso verso l’alto attraverso un strato sottile per capillarità. I composti si muovono con diversa velocità, in base alla diversa affinità della sostanza analizzata, verso un eluente e verso la fase stazionaria. Si ha separazione poiché i composti più affini all’eluente si muovono di più sulla lastra.

6 “Lauree Scientifiche”
Progetto “Lauree Scientifiche” FASE STAZIONARIA La fase stazionaria è generalmente uno strato dallo spessore uniforme di circa 1 mm di materiale adsorbente, depositato su una lastra di vetro o plastica. Il materiale adsorbente può essere gel di silice, allumina, cellulosa in polvere o polvere di diatomee, tutti materiali polari

7 “Lauree Scientifiche”
Progetto “Lauree Scientifiche” FASE MOBILE La fase mobile è un solvente opportunamente scelto (od una miscela di solventi), capace di separare i componenti della miscela da analizzare e poco affine per polarità alla fase stazionaria scelta.

8 TECNICA CROMATOGRAFICA
Progetto “Lauree Scientifiche” TECNICA CROMATOGRAFICA La traccia arancione è la sostanza più affine con l’eluente in quanto ha percorso un tragitto più lungo. La traccia gialla rappresenta una sostanza meno affine all’eluente,infatti ha percorso una distanza minore.

9 Separazione TLC di estratto di pomodoro
Progetto “Lauree Scientifiche” Separazione TLC di estratto di pomodoro Analizzare un concentrato di pomodoro Estrarre sostanze principali: licopene e β-carotene Eseguire la tecnica cromatografica TLC Separare ed identificare componenti

10 Pigmenti nel concentrato di pomodoro:
Progetto “Lauree Scientifiche” Pigmenti nel concentrato di pomodoro: LICOPENE: sostanza appartenente alla classe dei carotenoidi, è il principale responsabile del colore rosso del pomodoro e di altri pigmenti gialli e rossi caratteristici di alcuni frutti e verdure (albicocca, pompelmo, cocomero, uva). E’ presente nel sangue e in natura si trova sottoforma di isomeri strutturali di tipo trans e in particolare nella frutta e nella verdura fresca la percentuale risulta essere di 30mg/kg. Possiede un’altissima capacità antiossidante e antiradicali liberi, per questo viene utilizzato in molteplici applicazioni terapeutiche. Attualmente viene studiato per curare le malattie degenerative delle cellule.

11 “Lauree Scientifiche”
Progetto “Lauree Scientifiche” β-Carotene: sostanza appartenente alla classe dei carotenoidi, determina il pigmento giallo-arancio di prodotti naturali, ad esempio della carota.

12 Descrizione dell’esperienza:
Progetto “Lauree Scientifiche” Descrizione dell’esperienza: Materiale utilizzato: Bilancia tecnica Pipette graduate 2 becker, beuta, matraccio Cotone idrofilo Sostanze utilizzate: 50g pomodoro concentrato Diclorometano N-esano Alcool etilico 95% Sodio solfato anidro

13 “Lauree Scientifiche”
Procedimento: Progetto “Lauree Scientifiche” Pesare nel becker 50g di concentrato di pomodoro e aggiungere 70ml di etanolo al 95% e agitare bene con la spatola; Mettere un po’ di cotone sul fondo di un imbuto e filtrare la miscela pressando leggermente Trasferire in becker la componente solida rimasta sul filtro; Trattare con 50ml di Diclorometano ed agitare per 5minuti; Filtrare in un imbuto munito di cotone e raccogliere il filtrato in una beuta. Si anidrifica con sodio solfato anidro. Portare a piccolo volume in pallone da 100ml in rotavapor e portare a secco.

14 SEMINA Progetto “Lauree Scientifiche” La semina viene effettuata
con il nostro campione da analizzare,tramite un apparecchio chiamato microsiringa o con un semplice capillare per punto di fusione; questo procedimento deve essere fatto accuratamente

15 “Lauree Scientifiche”
Progetto “Lauree Scientifiche” OSSERVAZIONI Il β-carotene è la componente che sale con maggiore velocità sulla lastra a causa della maggiore affinità con l’eluente. Il licopene invece viene rallentato perché instaura dei legami con la fase stazionaria che è il gel di silice. Licopene β-carotene Campione

16 “Lauree Scientifiche”
Progetto “Lauree Scientifiche” ANALISI DATI L’analisi dei dati si basa su un fattore chiamato: Rf Rf= corsa della macchia /corsa dell’eluente Ogni sostanza ha un Rf diverso.

17 “Lauree Scientifiche”
Progetto “Lauree Scientifiche” ANALISI A UV Qualora non sia possibile osservare direttamente le macchie di campione sulla superficie della lastrina - caso molto frequente - si può ricorrere all'osservazione sotto luce ultravioletta o alla reazione con reagenti che sviluppano composti colorati

18 “Lauree Scientifiche”
Progetto “Lauree Scientifiche” CONFRONTO SPETTRI LICOPENE STANDARD LICOPENE ESTRATTO

19 “Lauree Scientifiche”
Progetto “Lauree Scientifiche” CONFRONTO SPETTRI β – CAROTENE STANDARD β – CAROTENE ESTRATTO

20 “Lauree Scientifiche”
Progetto “Lauree Scientifiche” CONCLUSIONI La tecnica TLC permette di separare i componenti principali di una miscela; le sostanze estratte sono pure, cioè molto simili agli standard. E’ possibile estrarre i componenti dal pomodoro.