Cicli di amplificazione

Presentazione sul tema: "Cicli di amplificazione"— Transcript della presentazione:

1 Cicli di amplificazione
5 10 15 20 25 30 35 40 45 Fluorescenza zeina (gene endogeno) transgene (Mon810) soglia 5% 1% 0,1% Figura 1. Curve di amplificazione relative a tre campioni di mais con un contenuto di Mon810 rispettivamente pari a 5, 1 e 0,1% su base peso. Per ciascun campione è mostrata l’amplificazione del gene di riferimento (zeina) e del transgene. E’ possibile notare come i valori di ciclo soglia (Ct) del gene endogeno siano molto simili nei tre campioni, mentre il superamento della soglia per l’amplificazione del transgene risulta ritardato in funzione del contenuto OGM.

2 Materiali di Riferimento Certificati (CRM)
(farine di semi a contenuto GM % noto) Estrazione DNA da CRM e campioni Reazione PCR su CRM e campioni Costruzione retta di calibrazione (CRM) (Ct vs. log numero di copie) Calcolo del numero di copie (campioni) (farine di semi a contenuto % peso noto) Materiali di Riferimento Procedura analitica Espressione del risultato Figura 2. Schema di analisi quantitativa PCR real time per la determinazione del contenuto di OGM in semi o matrici alimentari

3 Figura 3. Rette di calibrazione relative al gene di riferimento (zeina) e al transgene (Mon810) ottenute dall’analisi di materiali a contenuto OGM noto. Le linee tratteggiate indicano, per un campione ignoto, le quantità di DNA totale e transgenico calcolate sulla base dei valori di ciclo soglia (Ct) osservati per i due sistemi.