La diagnostica di laboratorio nella patologia infettiva

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1 La diagnostica di laboratorio nella patologia infettiva
Azienda osp Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo La diagnostica di laboratorio nella patologia infettiva D.ssa Marina Musumeci

2 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Malattia infettiva Ogni condizione morbosa che riconosce come causa necessaria della sua insorgenza l’azione di un’agente patogeno appartenente ad uno dei seguenti gruppi: Virus Batteri Miceti Parassiti 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

3 Infezioni sintomatiche Infezioni asintomatiche
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Infezioni sintomatiche Infezioni asintomatiche 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

4 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Diagnosi Definizione dell’eziologia e della patogenesi di un processo morboso. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

5 Indagini di Laboratorio o strumentali
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Ipotesi diagnostica Raccolta dei dati anamnestici e clinici con conseguente formulazione di un sospetto o di un orientamento diagnostico. Indagini di Laboratorio o strumentali Utili per confermare o smentire l’ipotesi diagnostica. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

6 Indagini con metodo diretto
Azienda osp Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Indagini con metodo diretto Esame microscopico Isolamento in coltura ed identificazione Biologia molecolare 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

7 Indagini con metodo indiretto
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Indagini con metodo indiretto Indicatori di flogosi (Emocromo, Ves, PCR, Proteine specifiche) Anticorpi specifici 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

8 Anticorpi Immunoglobuline leganti l’antigene: solubili o di membrana
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Anticorpi Immunoglobuline leganti l’antigene: solubili o di membrana 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

9 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo IGM Normalmente sono transitorie e indicative di infezione acuta in atto. IGG Compaiono più tardivamente, raggiungono il picco 4-6 settimane dopo l’infezione e, spesso, persistono per tempi prolungati 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

10 Qual’è il principio analitico?
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Qual’è il principio analitico? 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

11 Metodi (emoagglutinazione, sieroagglutinazione) Agglutinazione RIA
Azienda osp Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Metodi Agglutinazione (emoagglutinazione, sieroagglutinazione) RIA ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) CLIA IFI 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

12 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

13 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

14 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

15 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

16 Malattia acuta o subacuta a prognosi favorevole
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Mononucleosi Malattia acuta o subacuta a prognosi favorevole Segni clinici: febbre irregolare, angina, linfoadenopatia latero-cervicale Agente eziologico: virus di Epstein-Barr Diffusione per via inalatoria o per contatto orale da portatore sano a persona non infetta 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

17 Mononucleosi Cellule del rinofaringe Linfociti B Anticorpi eterofili
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Mononucleosi Cellule del rinofaringe Linfociti B Anticorpi eterofili Attivazione dei linfociti T CD8 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

18 Mononucleosi Periodo di incubazione: da 35 a 45 giorni
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Mononucleosi Periodo di incubazione: da 35 a 45 giorni Superata la fase acuta, il virus continua ad essere dismesso dalle cellule orofaringee. Riattivazione di malattia spesso in modo atipico o asintomatico 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

19 Mononucleosi Emocromo Anticorpi eterofili
Azienda osp Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Mononucleosi Esami di Laboratorio Emocromo Anticorpi eterofili Anticorpi specifici diretti contro: Antigeni del capside (VCA IgM e IgG) Antigene precoce (EA) Antigeni nucleari (EBNA IgG) 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

20 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Mononucleosi VCA IgM: compaiono precocemente e scompaiono entro 4-6 settimane VCA IgG: raggiungono il picco a 2 settimane dall’inizio della malattia EA IgG: sono presenti nella fase acuta, persistono per 3/6 mesi; possono permanere per molti anni; positivi nelle riattivazioni. EBNA IgG: assenti nella fase acuta, si rilevano 2/4 mesi dopo l’inizio e permangono perennemente. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

21 Mononucleosi Infezione primaria acuta: VCA IgM, VCA IgG, EA IgG
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Mononucleosi Infezione primaria acuta: VCA IgM, VCA IgG, EA IgG Convalescenza (o riattivazione): VCA IgM, VCA IgG, EBNA IgG, (EA IgG) Infezione pregressa: VCA IgG, EBNA IgG 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

22 Toxoplasmosi Antropozoonosi ubiquitaria da Toxoplasma Gondii
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Toxoplasmosi Antropozoonosi ubiquitaria da Toxoplasma Gondii Ciclo vitale: Oocisti Sporozoiti Tachizoiti Bradizoiti L’infezione viene contratta mediante l’ingestione di carni crude o poco cotte e mediante l’ingestione di verdure crude 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

23 Toxoplasmosi In gravidanza:
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Toxoplasmosi In gravidanza: Il rischio di trasmissione aumenta con lo sviluppo del circolo placentare. Il rischio di indurre gravi danni al feto è maggiore se l’infezione congenita è contratta precocemente. Infezioni congenite contratte durante il terzo trimestre di gravidanza sono generalmente asintomatiche. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

24 Infezione da Citomegalovirus
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Infezione da Citomegalovirus Famiglia hepesviridae Spettro d’ospite ristretto In vivo ciclo replicativo lento, induce inclusioni intranucleari, intracitoplasmatiche e latenza nelle cellule mononucleate del sangue e nei progenitori midollari 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

25 Infezione da Citomegalovirus
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Infezione da Citomegalovirus Trasmissione: per contatto interumano. Nella popolazione adulta il contatto molto stretto e quotidiano con i bambini gioca un ruolo importante per la diffusione dell’infezione. Fonti d’infezione: secrezioni oro-fringee, urina, latte materno, sperma, secrezioni vaginali, feci, sangue. Eliminazione: con le urine protratta nel tempo. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

26 Infezione da Citomegalovirus
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Infezione da Citomegalovirus In gravidanza: Un’infezione primaria contratta nel primo trimestre di gravidanza aumenta il rischio di prognosi feto-neonatale più grave. Danni da infezione congenita: severe compromissioni cerebrali con difetti dello sviluppo psicomotorio e ipoacusia neurosensoriale. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

27 Rosolia Agente eziologico: RNA virus
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Rosolia Agente eziologico: RNA virus Il virus penetra nel tratto respiratorio dove avviene la prima fase di replicazione cui fa seguito una seconda nei linfonodi cervicali. Incubazione : da due a tre settimane La fase viremica dura per i sette giorni precedenti la comparsa dell’esantema insieme con l’escrezione virale dal rinofaringe e persiste da sette a dodici giorni dopo il rash. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

28 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Rosolia Le IgM compaiono prestissimo, raggiungono il picco dopo 7-10 giorni persistono fino a 60 giorni dalla comparsa dell’esantema Le IgG compaiono dopo 2-5 giorni dalla comparsa delle IgM e persistono indefinitamente conferendo l’immunità 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

29 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Rosolia In gravidanza: Se contratta entro le prime settimane, l’infezione può determinare aborto o gravi alterazioni transitorie e/o permanenti definite come “Sindrome della Rosolia Congenita” (SRC) 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

30 Quadri sierologici possibili
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Quadri sierologici possibili Assenza di immunità: IgG –/IgM - Immunità da infezione pregressa: IgG+ /IgM- Stato immunitario non definibile: IgG indeterminate e IgM negative Se IgG -/IgM+: infezione in fase iniziale o risultato falso positivo (da reazione crociata) 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

31 Quadri sierologici possibili
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Quadri sierologici possibili IgG+/IgM+: effettuare una seconda determinazione utilizzando metodo analitico alternativo, ma con la medesima sensibilità. Test di avidità 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

32 Infezione da HIV HIV: retrovirus Cellule bersaglio: linfociti T CD4
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Infezione da HIV HIV: retrovirus Cellule bersaglio: linfociti T CD4 HIV1 e HIV2 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

33 Infezione da HIV Infezione primaria Fase di latenza clinica
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Infezione da HIV Infezione primaria Fase di latenza clinica Fase clinicamente manifesta 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

34 Infezione da HIV Trasmissione: Per via sessuale Per via ematica
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Infezione da HIV Trasmissione: Per via sessuale Per via ematica Per via materno-fetale 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

35 Infezione da HIV positivo Test di screening III generazione
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Infezione da HIV Test di screening III generazione IV generazione Test di conferma: positivo indeterminato negativo 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

36 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Infezione da HIV Stadiazione e monitoraggio della risposta alla terapia: Linfociti T CD4 Carica virale (HIV RNA) 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

37 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite Processo infiammatorio a carico del fegato istologicamente caratterizzato da necrosi parenchimale e infiltrazione flogistica. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

38 Epatiti virali HAV HBV HCV HDV HEV
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatiti virali HAV HBV HCV HDV HEV 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

39 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite acuta Danno improvviso con aumento significativo delle transaminasi (dieci volte il limite superiore). 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

40 Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite cronica persistenza di ALT elevate per oltre sei mesi dopo l’episodio acuto; Riscontro di ALT elevate in più di un’occasione per un periodo di oltre sei mesi. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

41 Epatite virale da virus A
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite virale da virus A Si trasmette per via oro-fecale; ha un periodo di incubazione di giorni; può dare epatite acuta, ma non cronica. IgM: indicano la fase acuta della malattia IgG: persistono per tutta la vita e sono protettive. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

42 Epatite virale da virus A
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite virale da virus A Sospetto di infezione acuta: anamnesi positiva per trasmissione oro-fecale ALT >10x limite di valore superiore confermata da almeno due controlli IgM anti-HAV 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

43 Epatite virale da virus B
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite virale da virus B Si trasmette per via parenterale, sessuale, perinatale; ha un periodo di incubazione compreso tra 45 e 160 giorni; dà infezioni in forma acuta e cronica; può evolvere in epatocarcinoma. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

44 Epatite virale da virus B
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite virale da virus B HBsAg: primo marcatore a comparire HBeAg: indice di attiva replicazione virale Anti-HBcIgM: presenti a titolo elevato nella fase acuta Anti-HBcIgG: già presenti nella fase acuta, persistono per tutta la vita. Anti-HBs: sieroconversione 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

45 Epatite virale da virus B
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite virale da virus B Sospetto di infezione acuta: anamnesi positiva per trasmissione parenterale e/o sessuale ALT >10x limite di valore superiore confermata da almeno due controlli HBsAg IgM anti-HBc 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

46 Epatite virale da virus B
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite virale da virus B Quadro sierologico dell’epatite cronica: HBsAg Anti-HBcIgG Anti-HBe 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

47 Epatite virale da virus B
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite virale da virus B Immunità naturale: Anti-HBs e Anti-HBcIgG Immunità da vaccino: Anti-HBs 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

48 Epatite virale da virus C
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite virale da virus C Si trasmette per via parenterale, sessuale, perinatale, ha un periodo di incubazione di giorni; può dare infezioni acute; può evolvere in cirrosi ed epatocarcinoma. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

49 Epatite virale da virus C
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite virale da virus C Anticorpi anti HCV: rilevabili mediamente dopo circa tre mesi dall’infezione. Risultato negativo: esclude con elevato grado di probabilità la malattia. Risultato positivo: infezione in corso o pregressa. 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci

50 Epatite virale da virus C
Azienda Ospedaliero Universitaria Vittorio Emanuele Policlinico - Catania U.O.C. Patologia Clinica O.V.E. - Ferrarotto Direttore Dr. F. Di Vincenzo Epatite virale da virus C Test di conferma: se valore index/cut-off <8.0 HCV RNA 29/03/2017 D.ssa M. Musumeci