STUDIO DELLA STRUTTURA E DELLA SIMMETRIA DI UN ENZIMA TRAMITE

Presentazione sul tema: "STUDIO DELLA STRUTTURA E DELLA SIMMETRIA DI UN ENZIMA TRAMITE"— Transcript della presentazione:

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2 STUDIO DELLA STRUTTURA E DELLA SIMMETRIA DI UN ENZIMA TRAMITE
MUTAGENESI La tirosil-tRNA sintetasi ha delle interessanti proprietà connesse alla sua simmetria: Sebbene l’omodimero sia simmetrico nel cristallo, esso in soluzione lega solo una mole di tirosina e forma una sola mole di tirosil adenilato. Questo fenomeno, che va sotto il nome di “half of the sites reactivity” è stato studiato tramite ingegneria proteica per sapere se l’asimmetria funzionale fosse indotta dal legame con i substrati o se fosse preesistente.

3 DELEZIONE DEL DOMINIO C-TERMINALE

4 COSTRUZIONE DEGLI ETERODIMERI

5 SEPARAZIONE DEGLI ETERODIMERI

6 Una seconda mutazione H45N può essere introdotta in una
delle due subunità degli eterodimeri per ridurre drasticamente la velocità di attivazione della tirosina in quella subunità. I risultati mostrano che sebbene il tRNA si leghi alla subunità di dimensioni normali, la sua acilazione avviene nell’altra subunità

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8 L’asimmetria è preesistente nell’enzima in soluzione
0,5 moles of Tyr-AMP are formed at wild-type rate 0,5 moles at mutant rate = subunità attiva = subunità inattiva Se l’asimmetria fosse indotta dalla formazione del Tyr-AMP, allora questo si formerebbe e sarebbe presente solo nelle subunità selvatiche, al contrario di quanto si osserva. Inoltre si formerebbe solo una mole alla velocità del selvatico (wild type rate).

9 Subtilisina