Upstream elements promoter elements transcription START site introns exons TRANSCRIPTION CAPPING SPLICING POLYADENYLATION m7Gm7G m7Gm7G AAAAAAAAAn m7Gm7G.

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1 upstream elements promoter elements transcription START site introns exons TRANSCRIPTION CAPPING SPLICING POLYADENYLATION m7Gm7G m7Gm7G AAAAAAAAAn m7Gm7G TRANSPORT TRANSLATION gene pre-mRNA polyadenylated pre-mRNA mature mRNA Espressione genica negli eucarioti

2 Splicing del pre-mRNA Scoperta della struttura del gene in esoni ed introni

3 Tipico gene di mammifero: Regione di circa 16kb 7-8 esoni Esoni: corti (circa 100-200 bp) Introni: anche molto estesi (>1kb) Gene dellovalbumina di pollo ibridato con il suo mRNA e visualizzato al microscopio elettronico

4 Come si studia lo splicing Procedura Procedura -Trascrivere lRNA in vitro -Incubare lRNA in estratti nucleari di cellule HeLa -Estrarre lRNA dopo diversi tempi di incubazione -Analizzare i prodotti della reazione tramite elettroforesi Procedura Procedura -Trascrivere lRNA in vitro -Incubare lRNA in estratti nucleari di cellule HeLa -Estrarre lRNA dopo diversi tempi di incubazione -Analizzare i prodotti della reazione tramite elettroforesi

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6 Sequenze consensus per lo splicing

7 La reazione di splicing

8 Analisi in vitro dei complessi di splicing gel nativo 1 - tempo 0 3 - tempo 30 2 - tempo 90

9 5 snRNPs 1. snRNAs = piccoli RNA nucleari (ricchi in Uracile, a localizzazione nucleoplasmatica): U1, U2, U4, U5 and U6 2. Componenti proteici specifici per ciascuna particella insieme ad un set comune a tutte le snRNPs (Sm) e centinaia di proteine (U2AF,BBP…..) Per lo splicing dei pre-mRNA è richiesto lo SPLICEOSOMA: small nuclear ribonucleoproteins