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Mutanti, mutanti, mutanti.... Mutanti che crescono normalmente ad alta CO2, ma diventano clorotici (gialli) a concentrazioni normali (350 ppm)

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1 Mutanti, mutanti, mutanti...

2 Mutanti che crescono normalmente ad alta CO2, ma diventano clorotici (gialli) a concentrazioni normali (350 ppm)

3 Mutanti nella fotorespirazione * P-Glycollate phosphatase * Catalase * Ser-Transhydroxymethylase * Dicarbox. acid translocator * Glutamate synthase * Glutamine synthetase * Rubisco activase * Ser/Glyox amino transferase Questo schema di reazioni è stato costruito in gran parte usando i mutanti …a timely example of the use of a directed genetic approach to dissect a complex problem in plant biology.

4 Un lavoro analogo condotto sui mutanti per la biosintesi dei lipidi (sempre da Sommerville)

5 Mutanti alterati nei lipidi I vari gruppi di complementazione definiscono i vari geni implicati nel processo

6 Esempi di mutanti possibili 1. pale green or yellow - chlorina (ch) 2. long hypocotyl when grown under white light (hy) 3. short hypocotyls when dark grown - constitutive photomorphogenic (cop) 4. lack of root geotropism when grown vertically - agravitropic (agr) 5. developmentally abnormal cotyledons or roots (various) 6. growth on 2,4-D - auxin resistant (aux, axr) 7. ethylene (triple response) insensitive (ein) 8. necrotic lesions in the absence of pathogens - accelerated cell death (acd) 9. anthocyanin deficiency - transparent testa (tt) 10. twisted petioles - tortifolia (tor) 11. early flowering (eaf) 12. wax deficient, shiny stems - eceriferum (cer) 13. iodine staining seed coats (M3) - starch excess (sex) 14. altered trichome development or distribution (gl1, hst)...

7 Scuriosate fra i vari mutanti possibili dello stock center, specialmente tra quelli già caratterizzati:

8 Cercate su Medline o ISI Web of knowledge della letteratura scientifica sui vari mutanti. Se non trovate niente, provate a cercare informazioni con google

9 N26alb1alb1 N31cer1cer1 N41 N50dw1dw1 N63 N67 N69phyBphyB N70hy4hy4 N71hy5hy5 N84tt3tt3 N85tt4tt4 N199mto1mto1 N208MTO2MTO2 N221varvar N237etr1etr1 N294phopho N889ldw1 (lesion dwarf 1) N3070etr1etr1 N3072eto1eto1 N3100aba1aba1 N3812XTC1XTC1 N6158det1det1 N6223phyAphyA N6224phyAphyB N6259cop1cop1 N8052ein3ein3 N8057ctr1ctr1 N16234axr-5axr-5 Se non sapete da dove cominciare iniziate a guardare questi mutanti nel catalogo del NASC

10 Altri esempi di mutanti o collezioni (ciclo xantofille) http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?tool=pubmed&pubmedid= (aluminium resistance) DNA methylation (GUN mutants) Cercate voi stessi con google o medline usando arabidopsis + mutant

11 Per il laboratorio: Formate gruppi da tre (omogenei per turno) Scegliete una classe di mutanti che vi interessa Fate una ricerca bibliografica per scoprire quello che si conosce già

12 Cosa fare dopo? Una volta scelta la classe di mutanti farete uno screening di popolazioni mutagenizzate per cercare nuovi mutanti di quella classe Dovete decidere qualè la miglior selezione: Piastra Terra Con o senza trattamenti Avere gli opportuni controlli (positivi e negativi)

13 da migliorare Protocollo lab un progetto di ricerca con i mutanti Stesso gene, fenotipi diversi Stesso fenotipo, geni diversi Ambiente o genotipo o loro interazione?

14 Ethylene Guzmán et al., (1990) Plant Cell. 2:513–523

15 Roman et al., (1995) Genetics 139:

16 Cop1 (constitutive photomorphogenesis)

17 auxin-resistant5/ IAA1 (a,b) Four-day-old dark-grown Col-0 (a) and axr5-1 (b) seedlings. (c–f) Twenty-day-old Col-0 (c), axr5-1 (d), axr1-3 (e), and axr5-1 axr1-3 (f) plants. Yang et al., (2004) Plant J. 40:772–782

18 aba1 Barrero et al. (2004) J. Exp. Bot. 56:

19 Arabidopsis thaliana plants grown at 22 o C (left) and 28 o C (right) Fenotipo o genotipo?

20 Mutanti nello sviluppo (embryo-lethal)

21 Flowering/sviluppo vegetativo

22 Mutanti biochimici (es. assenza di vitE) Porfirova et al. (2002) PNAS 99:


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