Titolo

Sommario

Massa 1

Massa 2

Stato dellarte

The Field-Flow Fractionation principle Thickness Externalfield Sample introduction Flow Detector Length Breadth Parabolic flow Thickness Sample

HF FlFFF / perché? A B C D

The HF FlFFF channel Flow Field Flow 1/8 PEEK ferrule 1/8 1/8 Teflon tube cPVC / PSf HF membrane 24x0.08 ID cm 1/8 PE fitting 1/8 PE Tee

Modo normale in HF FlFFF Meccanismo di ritenzione Browniano Modo normale in HF FlFFF Meccanismo di ritenzione Browniano v l Flusso z Campo L U x rfrfrfrf

Fase mobile: Ammonio acetato 50 mM ;pH7 V in =0.70 ml/min ;V rad =0.38 ml/min BSA 2% in FM ;mw 66 kDa Hrp 1% in FM ; mw40 kDa AP 1% in FM ; mw 160 kDa Fer 1% in FM ; mw 449 kDa Frazionamento di proteine in HF FlFFF

Y = A + B * X ParameterValueError A b Costruzione della retta di taratura lnD vs lnM t R = 8D ln V out V in D= kT 3 d rf2rf2 D=A M -b

NUOVO ASSETTO STRUMENTALE PER ACCOPPIAMENTO HF FFF ES/TOF/MS mobile Fase He W W o oo o oo ES/TOF/MS Rivelatore UV-VIS (DAD) POMPA II Acquisizione ed elaborazione dati Acquisizione ed elaborazione dati POMPA I M1M1 M2M2 W Hollow fiber

Peso Molecolare calcolato: ±1.74 Peso Molecolare teorico: BSA non denaturata UV TIC

Spettro HF-FFF-MS della Mioglobina A9A8 A7 A A: ±0.58 Da Peso Molecolare Mioglobina: Da Peso Molecolare Eme: Da

B11 B10 B9 B8 B7 A10 A9 A8 A7 A: ±0.58 Da B: ±0.27 Da HF-FFF-MS LC-MS UV

A9 +Na + +2Na + +3Na + +CH 3 COO - Introduzione Diretta HF-FFF Confronto spettri ES/MS del complesso Mioglobina/Eme

A B C D E F Spettro dellHRP TICUV

C D E F Glicosilazione A B Ca 2+

Conclusioni e Prospettive

Ringraziamenti

Efficiency in HF FlFFF ipolylongneq H inj HHHHH Focusing L0L0 van Bruijnsvoort, M.; Kok, W.Th; Tijssen, R. Anal Chem 2001, 73, 4736 Elution

Peso Molecolare misurato: ±0.35 Da Peso Molecolare teorico: Da

Peso Molecolare misurato: ±1.05 Da Spettro ES/MS del lisozima separato in FFF dalla BSA

Peso Molecolare misurato: ±4.38 Da Liso+8 Liso Spettro ES/MS della BSA separata in FFF dal lisozima TICUV

The HF FlFFF instrumental scheme Waste Metering valve 4-way valve T-valve Mobile phase Waste Injection port Metering valve Mobile phase Pump Pump 2 Hollow fiber channel Pressure gauge Pressure gauge UV-DAD ESI/qTOF Splitting valve

Basic expressions in normal HF FlFFF Retention Flow Field