Synthesis of B 12 bioconjugates

Hogenkamp, H. P. C. et al. In Chemistry and biochemistry of B 12 ; Banerjee, R., Ed.; John Wiley & Sons: New York, 1999 Brown, K. L. Chem. Rev. 2005, 105, Precursore. Coenzima per la metilmalonyl-CoA mutasi. Coenzima per la metionina sintasi. La vitamina B 12 (CNCbl) ed alcuni suoi derivati

Modifica di cobalamine Wilbur, D. S. Bioconjugate Chem , 7, Coniugazione alle catene propionamidiche e acetamidiche Coniugazione al gruppo fosfato Coniugazione al gruppo 5’-OH Coniugazione all’atomo di cobalto Il bioconiugato deve mantenere un’alta affinità verso la proteina di trasporto TC.

Modifica di cobalamine Coniugazione all’atomo di cobalto

Modifica di cobalamine Co C N = C N R. Alberto et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2004, 43, 5025 Co C N R. Alberto et al., Chem Eur. J. 2005, 11, 4089 Co D. S. Wilbur et al., Bioconjugate Chem. 1996, 7, 217 Co C. B. Grissom et al., Bioconjugate Chem. 1997, 8, 498

Modifica di cobalamine Brown, K. L. Chem. Rev. 2005, 105, Coniugazione alle catene propionamidiche e acetamidiche e d c b a g f

Modifica di cobalamine Wilbur, D. S. Bioconjugate Chem. 1999, 10, 912 e

Modifica di cobalamine b Hogenkamp, H. P. C. et al. Mayo Clin. Proc. 2000, 75:

Modifica di cobalamine d b Hogenkamp, H. P. C. et al. Nucl. Med. Biol , 27, 89

Struttura della transcobalamina II Wuerges, J.et al. Proc. Natl. Acad. Sci.USA 2006, 103,

Sintesi dei bioconiugati CNCbl-DTPA e CNCbl-TTHA DTPATTHA Py, DMSO, 45°C, 24h P. Siega, J. Wuerges, F. Arena, E. Gianolio, S. N. Fedosov, R. Dreos, S. Geremia, S. Aime e L. Randaccio, Chem. Eur. J., 15, (2009).

13 C NMR: informazioni strutturali Caratterizzazione di CNCbl-DTPA e CNCbl-TTHA Spettro di massa ESI-MS: presenza di un picco corrispondente al peso molecolare del bioconiugato.

Caratterizzazione CNCbl-DTPA e CNCbl-TTHA Elettroforesi: informazioni sulla carica del prodotto La formazione di un prodotto carico negativamente è evidente dal confronto con la CNCbl neutra di partenza. CNCbl CNCbl-DTPA

Struttura della transcobalamina II

Sintesi di derivati con Gd 3+ Gd 3+

Caratterizzazione di CNCbl-DTPA-Gd Spettro di massa ESI-MS: ESI-MS: presenza del picco corrispondente al peso molecolare.

Caratterizzazione di CNCbl-DTPA-Gd Elettroforesi: informazioni sulla carica del prodotto CNCbl-DTPA CNCbl-DTPA-Gd

0 0.5h 1h 2h 3h 4h 6h 8h 10h 23h Caratterizzazione: reazione di idrolisi CNCbl CNCbl-DTPA-Gd 0.5mM in acqua (pH=7.2ca, 37°C, NaCl 150mM).

Synthesis of B 12 bioconjugates

Sintesi del derivato CNCbl-DTPA- Gd 3+

I tessuti che proliferano rapidamente hanno un livello di assunzione di Cbl molto superiore alla norma. Brown, K. L. Chem. Rev. 2005, 105, e rif. Hogenkamp, H. P. C. et al. Mayo Clin. Proc. 2000, 75, Utilizzo di derivati della vitamina B 12 per la diagnostica (agenti per l’imaging) e la terapia antitumorali. Trasporto ed assorbimento Nelle cellule tumorali il numero di recettori di membrana del complesso TC-Cbl è accresciuto e probabilmente anche il numero di turn-over.

Cbl: essenziale nel metabolismo umano deve essere assunta con gli alimenti Hogenkamp, H. P. C. et al. Mayo Clin. Proc. 2000, 75, Brown, K. L. Chem. Rev. 2005, 105, Trasporto ed assorbimento Il trasporto dal cibo alle cellule avviene grazie a tre proteine di trasporto: l’aptocorrina (HC), il fattore intrinseco (IF) e la transcobalamina (TC). IF-Cbl In tutti i tessuti l’assorbimento cellulare per endocitosi è regolato da: - la formazione di un complesso Cbl-TC - l’interazione di Cbl-TC con recettori specifici della membrana cellulare TC-Cbl recettore

Reattività Studio preliminare dell’idrolisi del legame estero. In acqua (pH=7.2ca, 37°C, NaCl 150mM).In siero bovino (pH=7.2ca, 37°C) h2h3h4h