Strumenti di laboratorio, metodi di sterilizzazione Laboratorio n° 2: Strumenti di laboratorio, metodi di sterilizzazione e la lavoro in condizioni sterili

Metodi di sterilizzazione e disinfezione  Sterilizzazione = distruzione o eliminazione di tutte le forme viventi, siano esse animali o vegetali, macroscopiche, microscopiche o submicroscopiche, innocue o nocive  Disinfezione = eliminazione degli agenti capaci di causare infezione o malattia.  Lavoro in condizioni sterili  necessario per ottenere e conservare colture pure di microrganismi  Metodi di sterilizzazione  calore secco mediante incenerimento sulla fiamma efficacia = ottima impieghi = molto limitati (strumenti di laboratorio metallici come anse, aghi)  flambatura e arroventamento Alla fiamma del bunsen, si può sterilizzare la superficie esterna delle provette, o beute. La fiamma del bunsen esercita un’azione germicida nell’aria intorno alla fiamma per un raggio di pochi cm, creando una zona sterile. Alla fiamma del bunsen, è anche possibile sterilizzare l’ansa o l’ago prima e dopo i prelievi.

Metodi di sterilizzazione e disinfezione  vapore sotto pressione (autoclave). Alla pressione di 1 atm. il vapore raggiunge una T di 121 °C alla quale le più resistenti spore batteriche vengono distrutte in 5-10 min. impieghi = oggetti in gomma, garze, terreni di coltura in brodo o agarizzati, purché privi di sostanze deperibili alle alte temperature. 10 +2 134 15 +1 121 30 +0,5 112 Tempo (min.) Pressione (atm) Temperatura (°C) 60 170 120 160 150 180 140 Vapore in pressione Calore secco

Metodi di sterilizzazione e disinfezione  Filtrosterilizzazione mediante filtri millipore. Si utilizza per le sostanze che non possono essere sterilizzate a caldo (zuccheri, latte, vitamine), si usano filtri porosi di acetato di cellulosa, capaci di trattenere i batteri e funghi di grandezza superiore ai loro pori.  Metodi di sterilizzazione  Raggi UV. Lampade germicide: azione legata alla capacità dei raggi UV di determinare rotture e mutazioni negli acidi nucleici (soprattutto DNA). Ottima efficacia ma limitata alle superfici esposte (radiazioni non penetranti). Impiego limitato alla sterilizzazione dell'aria e delle superfici.

Lavoro in condizioni sterili  Cappa a flusso laminare

Attività di laboratorio  Preparazione di substrati per colture fungine  tipologie e scelta dei substrati  preparazione dei substrati (PDA, PDB, PDA acidificato)  sterilizzazione attraverso microfiltrazione  preparazione delle piastre per la crescita di funghi  Trasferimento di microrganismi  microrganismi colturabili  trasferimento di un fungo patogeno e di un antagonista: Botrytis cinerea e Trichoderma spp.