IDONEITA’ E STAMINOAFERESI NEL DONATORE APLOIDENTICO MARIA TERESA MARIANO

Impegno Centro Donatori Centro Prelievi

LYMPHOCYTE COLLECTION Aplo-TRANSPANT + TK CELLS DONOR CENTRE COLLECTION CENTRE 1- DONOR SELECTION 4 - MOBILIZATION MANAGEMENT 2 - DONOR CLEARENCE 3 - PRE MOBILIZATION LYMPHOCYTE COLLECTION (TK CELLS) 5 - PBSC APHERESIS UTM: Aplo-TRANSPANT + TK CELLS LABORATORY - CELL MANIPULATION PURITY YIELD

DONOR CENTRE

HLA DONOR SELECTION 1. SELECTION

HLA-HAPLOTYPE-MISMATCHED- TRANSPLANT

NK ALLOREACTIVITY SELECTION LEUKEMIA RELAPSE EVENT FREE SURVIVAL

DONOR CLEARENCE Donations (autologous or allogeneic), …. di perseguire la difesa della vita, la tutela della salute fisica e psichica dell'uomo e il sollievo della sofferenza, cui ispirerò con responsabilità e costante impegno scientifico, culturale e sociale, ogni mio atto professionale; Donations (autologous or allogeneic),  shall not interfere with the donor health.

IDONEITA’: come? Documenti: D.L: 3 marzo 2005. e DECRETO modifica 5 dicembre 2006 DIRETTIVA 2006/17/CE DELLA COMMISSIONE dell’8 febbraio 2006 che attua la direttiva 2004/23/CE del Parlamento europeo e del Consiglio per quanto riguarda determinate prescrizioni tecniche per la donazione, l'approvvigionamento e il controllo di tessuti e cellule umani DIRETTIVA 2006/86/CE DELLA COMMISSIONE del 24 ottobre 2006 che attua la direttiva 2004/23/CE del Parlamento europeo e del Consiglio per quanto riguarda le prescrizioni in tema di rintracciabilità, la notifica di reazioni ed eventi avversi gravi e determinate prescrizioni tecniche per la codifica, la lavorazione, la conservazione, lo stoccaggio e la distribuzione di tessuti e cellule umani ORDINANZA 22 novembre 2000 Non idoneitàˆ alla donazione di sangue di coloro che hanno soggiornato per oltre sei mesi nel Regno Unito nel periodo dal 1980 al 1996. Etc…

CLINICAL EVALUATION National and International guide lines: SIMTI; IBMDR, JACIE. Rx torace * - Fosfatasi alcalina - Tempo di Quick - HCV-RNA - Un accurato esame clinico e cardiologico con ECG, che valuti la sua situazione cardiovascolare* - Uricemia - Complementemia: C3-C4 - HIV1-RNA - Ves - TPHA - LDH, - Esame urine - Anti-CMV IgG e IgM - CPK - Beta HCG - HSV, HVZ; EBV - ALT/AST, γGT, - Gruppo ABO e Fattore Rh e fenotipo Rh - Toxotest IgG e IgM - Visita cardiologica e Ecocardiogramma* - Bilir.Tot e frazionata, - HTLV I/II (indicazione specifica) - Prot.Tot, - anti-HAV IgG e IgM - Emocromocitometrico completo - Elettroforesi Proteica - ANTI-HIV-1+2 /Ag - West-Nile (indicazione specifica) - Ferritina - anti-HCV - Elettroliti: Ca, Na, K, Cl - Elettroforesi Hb (su valutazione del medico) - HbsAg - Visita medica - anestesiologica - Creatinina - Anti-HBs - Trigliceridi - anti-HbcAg - Ecoaddome superiore - Colesterolo tot. e HDL - PT, PTT - anti-HBeAg - Screening trombofilia. - Glicemia - Fibrinogeno, - HBV-DNA

COLLECTION CENTRE

LYMPHOCYTE COLLECTION (TK CELLS) 3 - PRE MOBILIZATION LYMPHOCYTE COLLECTION (TK CELLS) The donor lymphocytes will be collected before G-CSF mobilization or marrow harvesting to avoid alterations in the immune repertoire, functionality, phenotype and cytokine production. The collection will be via lymphocytoaphaeresis (at least 10-13x109 total WBC  13-15 L leukapheresis)

4.

GROWTH FACTOR ADMINISTRATION PROTOCOLS Infusion of suicide-gene-engineered donor lymphocytes after family haploidentical haemopoietic stem-cell transplantation for leukaemia (the TK007 trial): a non-randomised phase I–II study. Fabio Ciceri Lancet Oncol 2009; 10: 489–500 Peripheral-blood haemopoietic stem cells were mobilised with granulocyte colony stimulating factor 12–15 μg/kg per day from 3 days before infusion and collected for a median of 3 days (range 2–4). Haploidentical stem cell transplantation after a reduced-intensity conditioning regimen for the treatment of advanced hematologic malignancies:osttransplantation CD8-depleted donor lymphocyte infusions contribute to improve T-cell recovery *Anna Dodero,1 Corradini (Blood. 2009; 113:4771-4779) Donors received filgrastim 8 mcg/kg twice daily beginning 4 days before leukapheresis.

GROWTH FACTOR ADVERSE EFFECTS Bone Marrow Transplantation (2003) 32, 873–880. Differences between graft product and donor side effects following bone marrow or stem cell donation G Favre et all. for the European Group for Blood and Marrow Transplantation (EBMT)

Table 2. Severe adverse events among 51,024 stem cell donations Halter, J. et al. Haematologica 2009;94:94-101

EMBT ANALYSIS 51.024 stem cell donation between 1993 and 2005 (x 10.000) Halter, J. et al. Haematologica 2009;94:94-101

STEM CELL HARVEST

HPC-A: ex-vivo enrichment Pre values Yield X N. WBC x106/ml 39 (17-71) 167 (20-339) 4 (0.5-9) MNC x106/ml 5.5 (2.8-10.5) 147 (18-247) 27 (5-50) CD34+ x106/ml 0.06 (0.01-0.2) 1.6 (0.14-7.9) (3-51)

A recommended minimum of 7 x 106 CD34+/kg, after CD34 cell selection A ‘MEGADOSE’ OF HAEMATOPOIETIC STEM CELLS OVERCOMES THE HLA - BARRIER A recommended minimum of 7 x 106 CD34+/kg, after CD34 cell selection

Ideal n. of NC/apheresis not > 60 x109 , and CD34+ up to 600 x106

Prevedendo un recupero del 70-80% J Clin Oncol 23:3447-3454. © 2005 by American Society of Clinical Oncology

N° procedures & CD34+/Kg SIT - Pescara

medie 50 58,3 3,05 32 5,98 311 PRE WBC E6/ml PRE CD 34/ml VOL. PROC N. X ex vivo CD34 TOT WBC E9 CD34+ /kG CD 3+ /kg EFFIC. %   DON. FAM. 64 45 3 55 92 8,41 415 53% 34 3,5 31 6,21 77% 62 56 2,6 19 25 6,95 426 56% 49 90 2,7 38 66 9,27 101% 48 58 3,3 23 113 4,57 59% 46 72 2,8 28 128 7,88 565 71% 63 77 21 41 6,50 276 40 4,4 96 73 8,07 64% 43 3,7 33 93 4,24 57% 60 71 2,2 11 68 2,52 219 63% 54 98 2,1 1,50 167 47% 3,0 148 80 5,25 265 75% 26 3,6 24 120 5,18 298 70% 44 70 6,68 341 52% DON-IBMDR 59 36 5,64 DON -IBMDR 95 2,5 108 6,81 139 60% medie 50 58,3 3,05 32 5,98 311 CI 95% 4,2 11,8 0,29 10,56 17,19 1,023 63,6 7%

DONOR CENTRE RESPONSABILITY IN DONOR MANAGEMENT COLLECTION CENTRE Lymphocytapheresis for TK “Megadose” CD34 Donor care during the mobilization time Donor care during the apheresis collections “best donor” selection “best donor” clearence Donor follow up to 10 years

Lymphocyte activation study Research? TEG Lymphocyte activation study