UNIVERSITA’ DI ROMA “LA SAPIENZA” FACOLTA’ DI SCIENZE MATEMATICHE FISICHE E NATURALI Corso di Laurea triennale in Scienze Biologiche Analisi dell’espressione della beta-sinucleina in Anolis carolinensis Candidato: Lucrezia Pilenzi Relatore interno: Dott. Mattia Toni Anno Accademico 2014 – 2015

Scopo dello studio Analizzare l’espressione della β-sinucleina nei principali organi dell’ Anolis carolinensis mediante Western Blotting.

Beta-sinucleina La famiglia delle sinucleine contiene le isoforme alfa, beta e gamma. Nei mammiferi è codificata dal gene SNCB Ha un peso molecolare apparente di circa 17kDa È altamente espressa nel sistema nervoso centrale La β e α sinucleine sono coinvolte in patologie neurodegenerative come la malattia del Parkinson e altre sinucleopatie.

Anolis carolinesis Diffusa negli Stati Uniti, Bahamas e Messico Ordine Squamati, sotto-ordine Sauria Diffusa negli Stati Uniti, Bahamas e Messico Vive in ambienti umidi L’esemplare maschio ha dimensioni maggiori e presenta una plica golare rosa Genoma totalmente sequenziato Anolis carolinensis - EOL-Encyclopedia of Life

Preparazione campione Incubazione con anticorpo Western Blotting Tecnica usata per la rilevazione e l’analisi di proteine. È basata sulla formazione di un complesso anticorpo-proteina, mediante il legame dell’anticorpo a proteine immobilizzate su una membrana di nitrocellulosa. Preparazione campione Elettroforesi Blotting Incubazione con anticorpo Rilevazione Acquisizione Analisi Un esperimento di Western Blotting può essere suddiviso in diverse tappe:

Parte sperimentale Scelta della specie e dell’anticorpo anti-β-sin della Santa Cruz tramite la comparazione delle sequenze di sinucleine di Anolis carolinensis, umane e di ratto. Analisi tramite Western Blotting. Analisi comparativa delle sequenze amminoacidiche della b-sinucleina di Anolis carolinensis, uomo e ratto  

Risultati EnR: encefalo ratto EnA: encefalo Anolis carolinensis Risultati Western Blotting. (A) Membrana di nitrocellulosa colorata con Rosso Ponceau. (B) Lastra fotografica. EnR: encefalo ratto EnA: encefalo Anolis carolinensis Mi: midollo Oc: occhio Mu: muscolo Cu: cuore In: intestino Pe: pelle Fe: fegato Po: polmone

Conclusioni Dall’analisi dell’espressione della β-sinucleina nei principali organi di Anolis carolinensis si è osservato: Presenza di bande altamente immunomarcate di 15/16 kDa nell’encefalo, nell’occhio e nel midollo. Nessuna espressione negli altri organi Presenza di bande immunomarcate nel cuore e nel polmone (12 kDa). Confronto con i livelli di espressione della β-sinucleina nei mammiferi (Lavedan 1998) .