Università degli Studi di Napoli Federico II FACOLTÀ DI SCIENZE MATEMATICHE, FISICHE E NATURALI DOTTORATO DI RICERCA IN SCIENZE CHIMICHE Sintesi e purificazione di un inibitore della trombina Candidata : Valeria Turco
Coagulazione del sangue
Inibitore della trombina Sito catalitico Trombina CSES Exo sito Ile-Thr-Tyr-Thr-Asp Pro-Glu-Ser-His-Asn-Asx-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-Gln Hirudina Chg-Arg-Nal-Thr-Asp- D Ala-ßAla-ßAla-Pro-Glu-Ser-His-Phe-Gly-Gly-Asp-Tyr-Glu-Glu-Ile-Pro-Aib-Aib-Tyr-Cha- D Glu Hirunorm IV 40 aa
Sito catalitico Trombina CSES Exo sito peptide porfirina TAMPP H-Chg-Arg-2Nal-OH CS3 HO-Succ-Pro-Glu-Tyr-Asp-Pro-Chg-OH ES7 Inibitore della trombina
CS ES N NH NH N NH-Succ-Pro-Glu-Tyr-Asp-Pro-Chg-OH NH 2 H 2 N H-Chg-Arg-2Nal-NH CS3-TAMPP-ES7
Fasi sperimentali Sintesi dell’inibitore Purificazione Inserzione del metallo
Primo peptide + peptide CS3 TAMPP CS3-TAMPP CS3-TAMPP-CS3 TAMPP CS3-TAMPP
Secondo peptide + peptide ES7 CS3-TAMPP CS3-TAMPP-ES7 CS3-TAMPP CS3-TAMPP-ES7 peptide ES7
Inserzione metallo Applicazione in diagnostica: rivelazione dei trombi MnAc 2
Inserzione metallo N NH NH N NH-Succ-Pro-Glu-Tyr-Asp-Pro-Chg-OH NH- 2Nal-Arg-Chg-H 2 H 2 N NH MnAc 2 N N N N NH-Succ-Pro-Glu-Tyr-Asp-Pro-Chg-OH NH- 2Nal-Arg-Chg-H 2 H 2 N NH Mn III mAU nm ,13 min mAU min 22,86 min mAU
Purificazione Mn III -CS3-TAMPP-ES7 HPLC: Minutes mAU : 210 nm, 8 nm 100 Mn-trans pulito nm min Spettro di massa: Mass (m/z) % Intensity (M)
Conclusioni E’ stato sintetizzato e purificato un nuovo inibitore della trombina, costituito da una porfirina che porta due peptidi diversi. E’ stato inserito uno ione metallico all’interno dell’anello porfirinico. Il complesso metallo-inibitore potrebbe trovare un’applicazione nel campo della diagnostica.
Interazione con la trombina legata ai coaguli Formazione dei coaguli La molecola sintetizzata lega in vitro coaguli di fibrina e ne inibisce la crescita Coagulo di fibrina + inibitore