Novità nella diagnostica molecolare dell’allergia alimentare Magda Lodolini Laboratorio analisi - Ospedale Maggiore di Bologna Bologna 27 Febbraio 2015 magda.lodolini@ausl.bo.it

alpha Gal Allergy Reazione IgE mediata a Una nuova causa di reazione allergica alimentare : la risposta IgE mediata al disaccaride galattosio alfa 1,3 galattosio (alfa gal)presente nelle strutture glicoproteiche e glicolipidiche delle membrane cellulari dei tessuti di tutti i mammiferi inferiori e delle scimmie del nuovo maondo. Esclusi i primati del vecchio mondo e l’uomo. Abbiamo perso questo componente cellulare nel corso del cammino evolutivo. Alfa gal è contenuto nei materiali contenenti gelatina. Numerosi tessuti di tutti i mammiferi inferiori

alpha-Gal Allergy (allergia alla carne rossa) Quadro clinico Reazione allergica ritardata (3-7 ore) dopo un pasto di carne rossa o frattaglie Sia la carne cruda che cotta possono causare reazioni Prurito diffuso, orticaria, angioedema Manifestazioni gastrointestinali Difficoltà respiratorie. No asma Possibile anafilassi Interessa adulti, adolescenti e bambini I patients sono spesso non –atopici che hanno tollerato la carne in passato.

alpha-Gal Allergy Particolarità Il primo esempio di food allergy da carboidrati Reazione clinica ritardata Non presente asma Dose dipendente Spesso sono pazienti non atopici che hanno tollerato la carne Recede nel tempo se… non esposizione a punture di zecca Il metabolismo dei grassi è più lento di quello delle proteine allergeniche. L’assorbimento intestinale come chilomicroni,il passaggio attraverso il dotto toracico e poi al circolo sanguigno richiede ore (3-4). Alfa gal è più concentrata nelle parti grasse della carne.

(Amblyomma americanum) Zecca Le zecche sono le responsabili della sensibilizzazione Lone star tick (Amblyomma americanum) Zecca europea (Ixodes ricinus)

Lone Star Tick Amblyomma americanum Virginia (Richmond)Tennessee(Nashville)Carolina (Columbia)

Le zecche Country Ticks Food No. Cases Australia I. holocyclus Kangaroo 400 France I. ricinus Pork kidney 40 Sweden Red meat 60 Japan I. sp. Beef 30 Germany 50 + 40 USA A. americanum 1 800 In europa : IXODES RICINUS

Cetuximab-Induced Anaphylaxis and IgE Specific for Galactose-α-1,3-Galactose N Engl J Med. 2008 Mar 13; 358(11): 1109–1117. doi:  10.1056/NEJMoa074943 Cetuximab-Induced Anaphylaxis and IgE Specific for Galactose-α-1,3-Galactose Christine H. Chung, M.D., Beloo Mirakhur, M.D., Ph.D., Emily Chan, M.D., Ph.D., Quynh-Thu Le, M.D., Jordan Berlin, M.D., Michael Morse, M.D., Barbara A. Murphy, M.D., Shama M. Satinover, M.S., Jacob Hosen, B.S., David Mauro, M.D., Ph.D., Robbert J. Slebos, Ph.D., Qinwei Zhou, Ph.D., Diane Gold, M.D., Tina Hatley, M.D., Daniel J. Hicklin, Ph.D., and Thomas A.E. Platts-Mills, M.D., Ph.D.

Cetuximab-Induced Anaphylaxis and IgE Specific for Galactose-α-1,3-Galactose N Engl J Med. 2008 Mar 13; 358(11): 1109–1117. doi:  10.1056/NEJMoa074943 Cetuximab-Induced Anaphylaxis and IgE Specific for Galactose-α-1,3-Galactose Christine H. Chung, M.D., Beloo Mirakhur, M.D., Ph.D., Emily Chan, M.D., Ph.D., Quynh-Thu Le, M.D., Jordan Berlin, M.D., Michael Morse, M.D., Barbara A. Murphy, M.D., Shama M. Satinover, M.S., Jacob Hosen, B.S., David Mauro, M.D., Ph.D., Robbert J. Slebos, Ph.D., Qinwei Zhou, Ph.D., Diane Gold, M.D., Tina Hatley, M.D., Daniel J. Hicklin, Ph.D., and Thomas A.E. Platts-Mills, M.D., Ph.D. The high prevalence of hypersensitivity reactions to cetuximab in the Southeast is supported by our own data from the Tennessee group and in other recent studies.11 The striking difference in the prevalence of the IgE antibodies against cetuximab provides an explanation for the difference in rates of clinical hypersensitivity reaction between subjects in Boston or northern California and those in Tennessee, Arkansas, or North Carolina.6,11,30.31,32 The explanation for the regional distribution of IgE antibodies against galactose-α-1,3-galactose in the United States is not clear. In conclusion, we have identified a mechanism underlying a hypersensitivity reaction to cetuximab, preexisting IgE antibodies against an oligosaccharide present on the recombinant molecule. Our results have implications for evaluating risks associated with antibody-based therapeutics and for understanding the relevance of IgE antibodies specific for post-translational modifications of natural and recombinant molecules.

Pediatrics Il primo studio osservazionale sulla popolazione pediatrica sul problema delle reazioni ritardate alla carne. (università Virginia)

Tabella 1 Pediatrics vol. 131, n. 5-2013

Fig 2

Tutti (o quasi) i bambini con Ige alfa gal hanno anche Ab vs manzo,maiale, latte, cane e gatto; a dimostrazione come questi estratti allergenici contengano alfa gal. Si impone quindi una dd nei confronti di allergia al latte, carne e cat-porc sindrome. DD che è soprattutto clinica e confrermata dal fatto che le componenti molecolari del latte del gatto (fel d1) sono negativi. Pediatrics vol. 131, n. 5-2013

Fig 3

Diagnosi differenziale EBM nella diagnostica molecolare LATTE dd clinica > 5 aa, allergia latte di NUOVA insorgenza: dd molecolare Bos d 4 Bos d 5 Bos d 8 CARNE rara sensibilizzazione a epitopi specifici della carne. spesso sostenuta da cross reattività con SA e actine. CAT-PORK syndrome Sostenuta da SA gatto (Fel d2) Reazione clinica rapida dopo ingestione di carne maiale I bambini che sviluppano IgE vs alpha gal, possono avere skin, intradermo, immunoassay, tests positivi a : latte, manzo, maiale, cane, gatto. Si impone la DD nei confronti di queste allergie. La allergia alla carne è molto raramente sostenuta da epitopi specifici di essa, molto più frequentemente da SA comuni ad altre carni, o proteine come mioglobina e actina. CARNE: BSA siero albumina bovina cross reattiva con latte; parzialmente termostabile. Mioglobina termostabile. Nel maiale : SOA da salame (Asero)da albumina sierica

EBM nella diagnostica molecolare GATTO / ALFA GAL IgE vs E2 No sintomi Raro Fel d 1 Freq Fel d5 Fel d5 : IgA sieriche del gatto, presenti anche nell’estratto di cute. Contiene epitopi glicosilati, che giustifica la positività di questa molecola nei bambini con IgE alfa gal. Infatti di tutti i 45 bambini positivi a E2 (con ige alfa gal) solo pochi (9 ) sono + a Fel d1 e concordemente hanno rinite e asma. La positività degli altri 36 è attribuibile a Fel d 5. Commins SP Current Allergy Asthma Resp. 2013,13:72-77

EBM nella diagnostica molecolare Dosaggio IgE vs alpha Gal utile strumento diagnostico e preventivo nei casi di : Reazione clinica dopo ingestione di carne Reazione intensa dopo puntura di zecca (misura preventiva) Tests sierologici positivi per uno o più estratti manzo, maiale, agnello (cross reattività?) Da Viracor IBT test

L’allergene che non c’è

Diagnostica molecolare frutta secca PR10 Bet v1 like proteine labili; SOA PROFILLINE Cross reattive, labili, SOA LTP proteine stabili, spesso anche severe reazioni STORAGE PR. proteine stabili. Severe reazioni OLEOSINE ?????

OLEOSINE Allergeni recentemente scoperti Proteine idrofobiche sulla superficie dei corpi oleosi Ruolo strutturale P.M. 16-24 KDa Presenti in sesamo, nocciola, arachide, semi soia Cross reattività Sintomi spesso severi SPT e CAP spesso negativi Le oleosine sono

OLEOSINE Allergene Fonte allergenica Funzione biologica Esposizione Ara h 10 Arachide oleosina ingestione Ara h 11 oleosina  ingestione  Cor a 12 Nocciola Cor a 13 Ses i 4 Sesamo Ses i 5

grazie per l'ascolto