Dottoranda Elena Giolo 30 marzo 2004 INIEZIONE INTRACITOPLASMATICA DI SPERMATOZOI TESTICOLARI CRIOCONSERVATI Dottoranda Elena Giolo 30 marzo 2004

1978 nascita del primo essere umano dopo fecondazione in vitro

FIVET Permette di ottenere un concepimento in presenza di compromissione funzionale e strutturale delle tube.

ICSI Permette di risolvere condizioni di sterilità maschili gravi

NEL 2% DELLE COPPIE INFERTILI IL PARTNER MASCHILE E’ AZOOSPERMICO

AZOOSPERMIA OSTRUTTIVA assenza o occlusione dei vasi deferenti; fallimenti di ricanalizzazione dopo sterilizzazione volontaria; eiaculazione retrograda incapacità all’erezione o all’eiaculazione;

Aspirazione di spermatozoi dall’epididimo MESA Aspirazione di spermatozoi dall’epididimo

MESA

Biopsia di tessuto testicolare TESE Biopsia di tessuto testicolare

AZOOSPERMIA NON OSTRUTTIVA Difetto severo della spermatogenesi

CRIOCONSERVAZIONE DEGLI SPERMATOZOI Permette di evitare un’inutile stimolazione della partner in caso di mancato recupero; Permette di evitare biopsie ripetute a ogni ciclo ICSI;

DECORONIZZAZIONE OVOCITI Valutazione maturità e morfologia citoplasmatica Facilitazione procedure di micromanipolazione

Micropipette con diametro di 140micron Hyaluronidase 80UI Micropipette con diametro di 140micron

Presenza del primo globulo polare OVOCITI MATURI Presenza del primo globulo polare

Micropipetta da iniezione diametro 5-7micron Micropipetta Holding diametro 10-20micron

Presenza di due pronuclei Presenza di due globuli polari OVOCITA FERTILIZZATO Presenza di due pronuclei Presenza di due globuli polari

Zigote

Embrione a 4 cellule Embrione a 2 cellule

Embrione a 8 cellule

Blastocisti

12 cicli ICSI: spermatozoi 239 cicli ICSI: liquido seminale 5 cicli ICSI: liquido seminale crioconservato 12 cicli ICSI: spermatozoi testicolari

Table I. Fertilization, embryo development and clinical outcome after intracytoplasmic sperm injection with cryopreserved testicular spermatozoa Patient/cycle No. of oocytes Injected MII oocytes 2PN oocytes Thawed viable oocytes 2–4 cell embryos day 2 6–8 cell embryos day 3 Embryos transferred Clinical pregnancies 26 311 236 150 23 114 76 64  8 %    76  64  84 56 33 Mean  12   9   5.7   4.3  3.1 2.6 ± SD ± 7.6 ± 4.8 ± 2.6 ± 2.2 ± 1.5 ± O.7 Gianaroli L. et al., Hum Reprod. 1999

Risultati della ICSI da TESE in pazienti azoospermici Totali (%) Freschi Crioconservati N° biopsie testicolari effettuate 7 2 5 Numero cicli effettuati 12 10 Ovociti recuperati 81 18 62 Ovociti maturi iniettati 67 (83) 15 (83) 52 (84) Ovociti fertilizzati 34 (51) 4 (26) 30 (57) Embrioni ottenuti 26 (76) 4 (100) 22 (73) Embryo transfer effettuati 8 (66) 1 (50) 7 (70) Embrioni trasferiti 18 (69) 3 (75) 15 (68) Gravidanze ottenute 2 (25) 2 (28)

Risultati della ICSI con liquido seminale eiaculato % cicli effettuati 239 ovociti recuperati 1708 ovociti maturi iniettati 1392 81 ovociti fertilizzati 980 70 embrioni ottenuti 596 61 embryo transfer effettuati 217 93 embrioni trasferiti 496 83 gravidanze ottenute 45 21

SVILUPPO EMBRIONALE

GRAVIDANZE

Spermatozoi eiaculati Spermatozoi eiaculati crioconservati (%) Spermatozoi eiaculati crioconservati Tese cicli effettuati 234 5 12 ovociti maturi iniettati 1392 31 67 ovociti fertilizzati 980 (70) 17 (55) 34 (51) embrioni ottenuti 596 (61) 15 (88) 26 (76) embryo transfer effettuati 217 (93) 5 (100) 8 (66) embrioni trasferiti 496 (83) 12 (80) 18 (69) gravidanze ottenute 45 (21) 2 (40) 2 (25)

CONCLUSIONE Crioconservazione degli spermatozoi testicolari, come tecnica efficace per evitare biopsie ripetute

Per molte coppie avere dei figli propri è estremamente importante e l’introduzione di queste nuove tecniche ha dato questa possibilità anche ai pazienti azoospermici.