TRAPIANTO APLOIDENTICO SERVIZIO DI MEDICINA TRASFUSIONALE POLICLINICO DI MODENA TRAPIANTO APLOIDENTICO RUOLO DEL LABORATORIO DI PROCESSAZIONE CELLULARE Gaiato 16-07-11

SELEZIONE CELLULARE SEMPLICE Gaiato 16-07-11

METODO DI SELEZIONE SELEZIONE IMMUNOMAGNETICA Gaiato 16-07-11

PRINCIPI DI FUNZIONAMENTO Particelle microscopiche (50 nm )costituite da destrano più componente ferrosa intensamente paramagnetica ( inerti non alterano le funzioni cellulari ) Ogni particella è legata ad un anticorpo specifico Apparecchio a colonna con un potente magnete permanente Gaiato 16-07-11

ESEMPI Particelle CliniMACS della ditta Mylteni sono specifiche per diversi antigeni Cellule staminali e progenitrici Monociti Natural Killers Cellule B Sottopopolazioni T Gaiato 16-07-11

DUE TIPI DI REAZIONE Diretta ( sull’ ag cellulare ) Indiretta ( contro la Biotina legata a un Ac specifico contro un Ag selezionato ) Gaiato 16-07-11

MODALITA’ DI SELEZIONE Gaiato 16-07-11

MODALITA’ DI SELEZIONE Per arricchimento Per deplezione Gaiato 16-07-11

MATERIALI Flacone da 7,5 ml che contiene il reattivo CLINIMACS specifico per l’ ag desiderato ( nel ns caso selezione per arricchimento dei CD 34 ) Un flacone lega fino a 0.6X10 esp 9 CD 34 selezionandoli da una raccolta di max 60X10 esp 9 cellule nucleate totali. Se uso 2 flaconi raddoppio la capacità. Gaiato 16-07-11

MATERIALI Gaiato 16-07-11

Perché trapiantare solo CD 34 ? PARTE SECONDA Perché trapiantare solo CD 34 ? Gaiato 16-07-11

VANTAGGI E SVANTAGGI DELLA ELIMINAZIONE DEI LINFOCITI T Vantaggio : no GVHD Svantaggi : no GVL più lento recupero risposta immune Gaiato 16-07-11

INFUSIONE DI LINFOCITI T CONTROLLABILI Linfociti T controllabili mediante la transduzione di un gene suicida Gaiato 16-07-11

Terapia con linfociti T transfettati Gaiato 16-07-11

COME E’ FATTO UN VETTORE CON GENE SUICIDA Gaiato 16-07-11

COME FUNZIONA Attivabile mediante la somministrazione di sostanze esogene ( ganciclovir ) Dopo somministrazione del farmaco, l'enzima tirosin-chinasi provoca una fosforilazione del ganciclovir, che si trasforma in ganciclovir-trifosfato e si incorpora nel DNA nel corso della replicazione. Il "falso" nucleotide causa successivamente la rottura del filamento del DNA, bloccando di fatto il processo di replicazione e provocando la morte della cellula. Gaiato 16-07-11