APOPTOSI (I) E’ la morte cellulare programmata (origina dal nucleo), la ritroviamo in numerosi meccanismi fisiologici e patologici: - eliminazione di cellule nell’ embriogenesi, per es. nella formazione del lume intestinale - eliminazione di cellule al ridursi di uno stimolo ormonale, es. nei tessuti estrogeno-sensibili del sistema riproduttivo femminile. - selezione clonale dei linfociti per l’ induzione di tolleranza al “self” durante lo sviluppo - eliminazione di cellule in tessuti ad elevata velocita’ di ricambio, per es. le cellule epiteliali di rivestimento dell’ intestino

APOPTOSI (II) La morte cellulare programmata la ritroviamo in numerosi meccanismi fisiologici e patologici: -uccisione di cellule infettate da virus da parte dei linfociti T citotossici -eliminazione di cellule portatrici di danni al DNA per infezione, irradiazione o agenti citotossici -eliminazione di cellule neoplastiche nei tumori -morte di cellule nervose in malattie neurodegenerative (malattia di Alzheimer).

APOPTOSI (IV) L’ apoptosi puo’ essere iniziata: - dall’ attivazione di un recettore di membrana causanti una cascata di segnali che attiva le caspasi (induzione da citochine mediata dal recettore per il fattore di necrosi tumorale, TNFR) - dalle vie del danno: - alterazione della membrana mitocondriale (aumento dei livelli di calcio libero nel citoplasma, danno da radicali liberi, anossia cellulare, morte cellulare mediata dalle perforine rilasciate dai linfociti T citotossici) - danno irreparabile del DNA (sistema p53-p73): danno da radiazioni, agenti chemioterapici antitumorali - danno della membrana cellulare (mediato dall’ attivazione della sfingomielinasi e conseguente generazione di ceramide): danno da radiazioni, radicali liberi.

PTPC= complesso dei pori di transizione della permeabilita’ AIF: Apoptosis Inducing Factor

APOPTOSI (V): regolazioni (I) L’ apoptosi viene finemente regolata. Bilancia delle proteine appartenenti alla famiglia Bcl-2. Bid, bad, bax,…: significato pro-apoptotico Bcl-2, Bcl-x,……: significato anti-apoptotico Che stabilisce, in ultima analisi, l’ apertura o la chiusura dei pori mitocondriali. Anche tramite splicing alternativo (che origina prodotti di diversa potenza) e tramite modificazioni post-traduzionali (ad es. cambiamento della forma della molecola – Bax).

(cromatina addensata, bolle citoplasmatiche)

TECNICA TUNEL TUNEL usa la Terminal deoxynucleotidyl Transferase per catalizzare il legame con dUTP coniugata con fluoresceina isotiocianato (FITC) alle rotture a doppio filamento del DNA (rivelazione della frammentazione del DNA mediante marcatura terminale di dUTP  catalizzata da TdT -> TUNEL). Fixed cells were washed in PBS and permeabilized for 2 minutes on ice in 0.1% Triton X-100, 0.1% sodium citrate. Then cells are washed, resuspended in 50µl of TUNEL reaction mixture (Boehringer Mannheim), containing dUTP-FITC and TdT, and incubated for 60 minutes at 37° in the dark. After that, the samples were washed and resuspended in 2µg/ml propidium iodide (PI) and RNAse for at least two hours before the analysis. Flow cytometric analyses were performed using a FACSORT (Becton Dickinson), detecting dUTP-FITC with channel FL1

Necrosi: morte dal citoplasma Necrosi. Patogenesi: carenza ATP, aumento concentrazione calcio, danno del citoscheletro, metaboliti reattivi dell’ ossigeno, danno delle membrane.

Danno cellulare subletale: fegato di alcolista. V = vacuolo grasso