Cicli di amplificazione 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Fluorescenza zeina (gene endogeno) transgene (Mon810) soglia 5% 1% 0,1% Figura 1. Curve di amplificazione relative a tre campioni di mais con un contenuto di Mon810 rispettivamente pari a 5, 1 e 0,1% su base peso. Per ciascun campione è mostrata l’amplificazione del gene di riferimento (zeina) e del transgene. E’ possibile notare come i valori di ciclo soglia (Ct) del gene endogeno siano molto simili nei tre campioni, mentre il superamento della soglia per l’amplificazione del transgene risulta ritardato in funzione del contenuto OGM.
Materiali di Riferimento Certificati (CRM) (farine di semi a contenuto GM % noto) Estrazione DNA da CRM e campioni Reazione PCR su CRM e campioni Costruzione retta di calibrazione (CRM) (Ct vs. log numero di copie) Calcolo del numero di copie (campioni) (farine di semi a contenuto % peso noto) Materiali di Riferimento Procedura analitica Espressione del risultato Figura 2. Schema di analisi quantitativa PCR real time per la determinazione del contenuto di OGM in semi o matrici alimentari
Figura 3. Rette di calibrazione relative al gene di riferimento (zeina) e al transgene (Mon810) ottenute dall’analisi di materiali a contenuto OGM noto. Le linee tratteggiate indicano, per un campione ignoto, le quantità di DNA totale e transgenico calcolate sulla base dei valori di ciclo soglia (Ct) osservati per i due sistemi.