Lespressione di un gene può essere controllata interferendo con la reazione di poliadenilazione La regolazione del gene che codifica per la proteina U1A Esempio di regolazione on/off della reazione di taglio e poliadeniazione La proteina U1A e presente nellU1 snRNP, particella ribonucleoproteica coninvolta nel processo di splicing E in grado di legare una sequenza sul proprio pre-mRNA, a monte del sito di taglio e poliadenilazione, contenente due motivi di sequenza simili a quello a cui si lega sullU1 RNA. Quando il livello della proteina U1A supera i livelli cellulari dellU1 snRNA laccumulo della proteina viene bloccata! D D D D

1) La proteina U1A lega il piccolo RNA di splicing U1 snRNA e con esso forma la particella ribonucleoproteica U1 snRNP coninvolta nel processo di splicing Complesso della snRNP U1: sono evidenziati le proteine Sm all'estremità 3' e altre proteine specifiche del complesso. Il sito di legame di U1A richiede una sequenza di 7 nucleotidi del loop e 3 bp dello stern.

free RNA U1A - Il sequenziamento del gene codificante U1A ha rivelato la presenza al 3', vicino al sito di poliadenilazione (AUUAAA), di 2 sequenze simili a quella del sito di legame sull U1 snRNA. Il saggio di ritardo elettroforetico utilizzando lmRNA di U1A marcato in continuo e quantità crescenti della proteina U1A conferma la presenza di due siti di legame per la proteina sul proprio messaggero 2) U1A è in grado di legare il 3 UTR del proprio pre-mRNA. Questa sequenza si trova a monte del sito di taglio e poliadenilazione.

Al contrario lutilizzo di un RNA già tagliato e quindi con un 3' OH libero, all'aumentare della proteina U1A la reazione di poliadenilazione era sempre più inibita. U1A WT - input U1A U1A Inverted poly(A) + 3) Quando il livello della proteina U1A supera i livelli cellulari dellsnRNA U1 la produzione della proteina viene bloccata! 4) Il controllo su U1A è quindi di tipo a feedback ed ha come target la corretta formazione del 3' del suo messaggero. Man mano che la quantità di U1A nel nucleo aumenta, questa si va a legare al 3' del proprio mRNA impedendo la poliadenilazione e di conseguenza destabilizzando il trascritto che viene degradato. In estratti contenenti i fattori di taglio e poliadenilazione e contemporaneamente EDTA, quindi viene inibita la reazione di poliadenilazione del pre-mRNA, si osservava un andamento inalterato delle reazioni di taglio. La proteina non blocca il taglio, bensì la poliadenilazione

U1A interagisce specificamente con la parte Cterminale di PAP, in un domino specifico che inibisce il suo normale funzionamento. Questa interazione è stata dimostrata con la tecnica del two hybrid in lievito. E' da notare inoltre che la sequenza del sito di poliadenilazione (AUUAAA) è un sito sub-canonico: in tal modo si ha un legame meno stabile con CPSF che può essere più facilmente scalzato. U1A interagisce specificamente con la parte Cterminale di PAP un sito sub-canonico

Formazione dellestremità 3 del pre-mRNA degli istoni

U7 snRNA Pre-mRNA per gli istoni Formazione dellestremità 3 del pre-mRNA degli istoni